本文關(guān)鍵詞： 氦氖激光 人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞 端粒長度 實(shí)時(shí)熒光定量PCR　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本實(shí)驗(yàn)將體外培養(yǎng)的人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞(Human fetal lung diploid fibroblasts2BS)作為細(xì)胞衰老模型,開展低強(qiáng)度激光對成纖維細(xì)胞端粒DNA長度影響的實(shí)驗(yàn)研究。采用不同輻照時(shí)間、不同輻照功率的低強(qiáng)度激光輻照實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞即年輕人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞,用四甲基偶氮唑鹽(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltrazolium bromide MTT)比色法檢測激光照射處理對細(xì)胞生長和增值的影響；采用相對定量實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction q-PCR)方法檢測細(xì)胞端粒DNA相對長度。結(jié)果如下： (1)MTT比色法檢測細(xì)胞生長與增值的結(jié)果顯示,激光照射后,實(shí)驗(yàn)組(即激光照射組)(功率2-5mmw)細(xì)胞生長趨勢顯著優(yōu)于對照組(非激光照射組)(P0.05)；提示激光照射對細(xì)胞生長不但沒有對細(xì)胞造成負(fù)影響,而是促進(jìn)細(xì)胞生長。 (2) q-PCR檢測細(xì)胞端粒DNA長度顯示：對照組中,老年2BS細(xì)胞端粒DNA長度較年輕2BS細(xì)胞端粒DNA短(P0.05),進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞端粒DNA長度隨著代齡的增加而縮短,從而也說明了端粒與細(xì)胞衰老息息相關(guān)。實(shí)驗(yàn)組中,老年細(xì)胞(2BS細(xì)胞在年輕時(shí)經(jīng)激光照射后傳代至老年時(shí))的端粒長度較對照組的老年細(xì)胞端粒長度長(P0.05)。提示,經(jīng)適當(dāng)激光照射后,細(xì)胞端粒DNA因衰老而變短的趨勢得到減緩。本研究從基因水平上為探討低強(qiáng)度激光延緩細(xì)胞衰老的激光生物效應(yīng)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)首次將激光照射應(yīng)用于人類細(xì)胞衰老模型,同時(shí)運(yùn)用最簡便、快捷、專一、靈敏、可重復(fù)性強(qiáng)的檢測細(xì)胞端粒DNA長度的方法——實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法來檢測細(xì)胞端粒DNA長度,提供低強(qiáng)度激光延緩細(xì)胞衰老的生物物理學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)和生物分子學(xué)理論基礎(chǔ),在細(xì)胞基因水平上探討低強(qiáng)度激光的抗衰老機(jī)理。同時(shí),通過實(shí)驗(yàn)篩選有生物意義的激光參數(shù),為低強(qiáng)度激光在延長細(xì)胞壽命、預(yù)防及降低與年齡相關(guān)性疾病的發(fā)生等方面的應(yīng)用提供新途徑和新技術(shù)。
[Abstract]:In this study, human fetal lung diploid fibroblast 2BS (BSs) of human fetal lung diploid fibroblasts cultured in vitro was used as the model of cell senescence. The effects of low intensity laser on the length of telomere DNA of fibroblasts were studied. The experimental group cells were irradiated with low intensity laser with different irradiation power, I. e., diploid fibroblasts of young embryo lung, treated with tetramethylazolium trimethylazolium. 5-Dimethylthiazol-2-yll-2. The effects of laser irradiation on cell growth and proliferation were detected by 5-diphenyltrazolium bromide MTT colorimetry. The relative quantitative real-time fluorescence polymerase chain reaction (. Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction q-PCR). Methods the relative length of telomere DNA was measured. The results were as follows: Cell growth and proliferation were detected by MTT colorimetry. The growth trend of the cells in the experimental group (i.e. the laser irradiation group) (power 2-5mmw) was significantly better than that in the control group (non-laser irradiation group). The results suggest that laser irradiation not only has no negative effect on cell growth, but also promotes cell growth. The length of telomere DNA was detected by q-PCR: in the control group, the telomere DNA length of the aged 2BS cells was shorter than that of the younger 2BS cells (P 0.05). Further verify that the length of telomere DNA is shortened with the increase of age, which also shows that telomere is closely related to cell senescence. The telomere length of the geriatric cells was longer than that of the control group (P 0.05). It suggested that the telomere length of the geriatric cells after laser irradiation was higher than that of the control group (P 0.05). The results suggested that the telomere length of the geriatric cells was higher than that of the control group. The trend of telomere DNA shortening due to aging has been slowed down. This study provides an experimental basis for the study of laser biological effects of low-intensity laser on delaying cell senescence at the gene level. In this experiment, laser irradiation was applied to human aging model for the first time, and it was the most convenient, rapid, specific and sensitive. A reproducible method for detecting the length of telomere DNA in cells-real-time fluorescent quantitative PCR method is used to detect the length of telomere DNA. To provide the experimental basis of biophysics and biomolecular theory of low-intensity laser to delay cell senescence, and to explore the anti-aging mechanism of low-intensity laser on the level of cell gene. In order to provide new approaches and techniques for the application of low intensity laser in prolonging cell life, preventing and reducing the occurrence of age-related diseases and so on.
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R329

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本文編號：1462929