發(fā)布時(shí)間：2018-01-22 22:58

  本文關(guān)鍵詞： 小泛素相關(guān)修飾物 骨鈣素 原核表達(dá) 胰島素分泌　出處：《中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志》2017年09期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：目的研究表達(dá)和純化大鼠未羧化骨鈣素融合蛋白并鑒定其活性。方法將大鼠的骨鈣素(BGLAP)基因克隆到p Sumo-Mut表達(dá)載體中,構(gòu)建小泛素相關(guān)修飾物-骨鈣素質(zhì)粒(p Sumo-BGLAP)并進(jìn)行質(zhì)粒酶切及測(cè)序鑒定。質(zhì)粒在大腸桿菌的表達(dá)系統(tǒng)中轉(zhuǎn)化后,利用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG),11℃低溫誘導(dǎo)方法,表達(dá)出小泛素相關(guān)修飾物-骨鈣素(Sumo-BGLAP)融合蛋白。融合蛋白通過(guò)Ni親和純化方法被純化,通過(guò)胰島素分泌實(shí)驗(yàn)被鑒定生物活性。結(jié)果質(zhì)粒的酶切及測(cè)序結(jié)果顯示與目的基因的序列和蛋白分子量吻合,表明質(zhì)粒p Sumo-BGLAP構(gòu)建成功。經(jīng)轉(zhuǎn)化、誘導(dǎo)和純化后較高純度的Sumo-BGLAP融合蛋白被獲得。胰島素分泌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,16.7 mmol·L~(-1)葡萄糖下,胰島素分泌為(37.64±3.80)μU·L~(-1),16.7 mmol·L~(-1)葡萄糖+0.03 ng·m L~(-1)Sumo-BGLAP融合蛋白作用時(shí),胰島素分泌為(63.91±4.67)μU·L~(-1),16.7 mmol·L~(-1)葡萄糖+0.3 ng·m L~(-1)Sumo-BGLAP融合蛋白作用時(shí),胰島素分泌為(68.47±5.83)μU·L~(-1)(均P0.01)。結(jié)論大鼠未羧化骨鈣素的融合蛋白被成功表達(dá)和純化,并且有生物活性,能用于進(jìn)一步研究其對(duì)葡萄糖代謝的調(diào)節(jié)作用。
[Abstract]:Objective to study the expression and purification of rat uncarboxylated osteocalcin fusion protein and identification of its activity. Methods the rat osteocalcin (BGLAP) gene was cloned into P Sumo-Mut expression vector, construction of small ubiquitin related modifier (P Sumo-BGLAP) - osteocalcin plasmid and plasmid enzyme digestion and sequencing. The plasmid was transformed into expression system in Escherichia coli, using isopropyl thiogalactoside beta -D- (IPTG), the low temperature of 11 DEG C for inducing expression of small ubiquitin related modifier - Osteocalcin (Sumo-BGLAP) fusion protein. The fusion protein by Ni affinity purification method was pure, secretion was identified by insulin. The biological activity of plasmid digestion and sequencing results showed that the molecular weight of the protein sequence and the target gene with that the plasmid P Sumo-BGLAP was constructed successfully. After transformation, after induction and purification of Sumo-BGLAP fusion protein with high purity was obtained. Islet Hormone secretion, the experimental results show that the 16.7 mmol - L~ (-1) glucose, insulin secretion (37.64 + 3.80) U - L~ (-1), 16.7 mmol - L~ (-1) ng - M L~ glucose +0.03 (-1) Sumo-BGLAP fusion protein, insulin secretion is (63.91 + 4.67) U L~ (-1), 16.7 mmol - L~ (-1) ng - M L~ glucose +0.3 (-1) Sumo-BGLAP fusion protein, insulin secretion is (68.47 + 5.83) U - L~ (-1) (P0.01). Conclusion the rat uncarboxylated osteocalcin fusion protein was successfully expressed and purified. And there is a biological activity, can be used to further study the regulatory effects on glucose metabolism.

【作者單位】： 山西醫(yī)科大學(xué)藥理教研室;山西醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生理學(xué)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;山西醫(yī)科大學(xué)兒科醫(yī)學(xué)系;山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81273564,81373464,81670710) 山西省留學(xué)回國(guó)人員科技活動(dòng)項(xiàng)目擇優(yōu)資助基金資助項(xiàng)目(2016-97)
【分類(lèi)號(hào)】：R3411
【正文快照】： (1.山西醫(yī)科大學(xué),a.藥理教研室;b.細(xì)胞生理學(xué)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;c.兒科醫(yī)學(xué)系,太原030001;2.山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院內(nèi)分泌科,太原030001)GAO Jing-ying1a,1b,1c,REN Le-le1a,DING Ya-qin1a,ZHONG Xiang-qin1a,BAI Tao1a,1b,2,LIU Yun-feng2,ZHANG Yi1a,1b(1.a.Departmen

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