本文關(guān)鍵詞： 許旺細(xì)胞 生物力學(xué) 骨延長術(shù) 周圍神經(jīng) 細(xì)胞增殖 基因表達(dá)譜　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：通過體外構(gòu)建許旺細(xì)胞循環(huán)牽張力學(xué)模型,對體外培養(yǎng)的許旺細(xì)胞實施循環(huán)牽張應(yīng)力刺激模擬載體神經(jīng)的緩慢牽張,探索循環(huán)牽張應(yīng)變刺激對周圍神經(jīng)來源許旺細(xì)胞增殖以及mRNA表達(dá)的影響,從細(xì)胞生物力學(xué)以及分子生物學(xué)角度探討肢體延長中的神經(jīng)生長延長機(jī)制。 方法： 1.體外平面循環(huán)牽張應(yīng)力加載模型的建立：將硅橡膠材料制作成0.1cm厚的透明薄膜,結(jié)合硅橡膠材料的泊松比以及彈性模量,應(yīng)用三維有限元分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,模擬硅橡膠受到牽張應(yīng)變后產(chǎn)生的形變；通過MTT方法比較細(xì)胞在硅橡膠和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)板上的生長情況,并采取體外皮下包埋實驗驗證硅橡膠材料是否具有生物學(xué)毒性。 2.許旺細(xì)胞的純化：分離新生6d的Wista大鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng),雙酶消化法分離許旺細(xì)胞,用S-100免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法對許旺細(xì)胞進(jìn)行鑒定。將收集到的細(xì)胞分為3組,分別應(yīng)用冷噴注法、改良冷噴注法和酶消化法對細(xì)胞進(jìn)行純化,純化后的細(xì)胞分別計算純度,流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞活性,并從細(xì)胞純度、細(xì)胞活性、純化后所得細(xì)胞數(shù)量三個方面對許旺細(xì)胞的純化方法進(jìn)行評估,從而尋找最佳的許旺細(xì)胞純化方法。 3.循環(huán)牽張應(yīng)變刺激加載：體外培養(yǎng)6d齡大鼠許旺細(xì)胞并傳至P3代,按照刺激強(qiáng)度分為0、5%和10%形變組,利用ElectroForce3200力學(xué)試驗儀搭載的BioDynamic生物反應(yīng)艙系統(tǒng),以6h為固定時間點對細(xì)胞進(jìn)行頻率為0.25Hz的周期性牽張應(yīng)力刺激。觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測不同應(yīng)力刺激下許旺細(xì)胞的增殖率,獲得許旺細(xì)胞增殖的最佳應(yīng)力值,并分為無力學(xué)刺激組和力學(xué)刺激組2組。Trizol分別提取細(xì)胞mRNA,采用高通量技術(shù)分析實驗組與對照組細(xì)胞基因表達(dá)譜差異,并采用聚類分析、GO分析等對實驗結(jié)果進(jìn)行分析整理。 結(jié)果： 1.本課題組自制的硅橡膠細(xì)胞載體表面應(yīng)力分布均勻,有效應(yīng)變面積分布大,生物學(xué)相容性尚可,在BioDynamic細(xì)胞應(yīng)力加載系統(tǒng)的配合下,可滿足許旺細(xì)胞的牽張刺激的實驗。 2.相比冷噴注法和差速酶消化兩種方法而言,改良冷噴注法提純許旺細(xì)胞存在操作簡便,獲得許旺細(xì)胞純度高、不影響細(xì)胞活性等優(yōu)點,缺點是對操作者實驗操作技術(shù)和經(jīng)驗要求相對較高,初學(xué)者不易掌握,需在多次實踐中摸索掌握,但不失為一種可供參考的許旺細(xì)胞純化新方法,適合在本實驗中繼續(xù)使用。 3.在5%的應(yīng)變刺激下,許旺細(xì)胞的S期細(xì)胞比例和增殖指數(shù)(PI)相比無應(yīng)變刺激時有所升高,然而15%的應(yīng)變刺激下,兩指標(biāo)同時降低；光學(xué)顯微鏡下可見許旺細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的形態(tài)學(xué)變化。比較實驗組與對照組基因表達(dá)譜,上調(diào)基因894個,下調(diào)基因1570個 結(jié)論：許旺細(xì)胞的增殖情況與所加載力的大小呈現(xiàn)一定的劑量相關(guān)性；適當(dāng)大小的牽張應(yīng)力通過某種機(jī)制作用于周圍神經(jīng)的許旺細(xì)胞并促進(jìn)其增殖,同時,牽張應(yīng)力可以改變許旺細(xì)胞多種基因的表達(dá)以及對許旺細(xì)胞的生命活動進(jìn)行一系列的調(diào)控,這些基因有可能與軸突的生長存在密切的聯(lián)系。
[Abstract]:Objective: to construct the Schwann cell cycle stretch mechanical model in vitro of cultured Schwann cells circulating lead Zhang Yingli nerve stimulation carrier slow distraction, exploration of cyclic stretching stimulation on peripheral nerve derived Schwann cells proliferation and mRNA expression of the influence of nerve growth in limb lengthening extension mechanism from the perspective of molecular biology and cell biomechanics.
Method錛，

本文編號：1443433