本文關(guān)鍵詞： 噬菌體 裂解酶 表達(dá) 抗菌活性　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的:克隆表達(dá)分支桿菌噬菌體D29裂解酶gp10,觀察該重組裂解酶對膿腫分支桿菌等多重耐藥菌的抑菌作用,為開發(fā)治療多重耐藥菌感染的藥物打下基礎(chǔ)。 方法:以噬菌體D29基因組DNA為模板,用PCR擴(kuò)增gp10基因片段,克隆入PET32a質(zhì)粒,構(gòu)建重組原核表達(dá)載體PET32a-gp10,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。SDS—PAGE分析表達(dá)蛋白的相對分子質(zhì)量和表達(dá)形式,離子交換層析純化重組蛋白后,用杯碟法測定其抗菌活性。 結(jié)果:PCR擴(kuò)增獲得長1454bp的gp10基因片段,經(jīng)PCR、雙酶切及測序證明重組質(zhì)粒PET32a-gp10構(gòu)建正確。SDS-PAGE顯示表達(dá)蛋白相對分子量約為54.8KD,與預(yù)期相符;目的蛋白在表達(dá)上清,碎菌上清和碎菌沉淀中均可見,純化后均一性可達(dá)90%。杯碟法測定重組蛋白對膿腫分支桿菌出現(xiàn)抑菌環(huán),對金黃色葡萄球菌沒有抑菌環(huán)。 結(jié)論:重組分支桿菌噬菌體D29裂解酶gp10對膿腫分支桿菌有明顯的抑菌作用,為治療膿腫分支桿菌感染提供了新路徑。
[Abstract]:Objective: to clone and express Mycobacterium bacteriophage D29 lyase gp10 and observe the bacteriostatic effect of the recombinant lyase on multidrug resistant bacteria such as Mycobacterium abscess. To lay a foundation for the development of drugs for the treatment of multidrug resistant bacteria infection. Methods: using the genomic DNA of phage D29 as template, the gp10 gene fragment was amplified by PCR and cloned into PET32a plasmid. The recombinant prokaryotic expression vector PET32a-gp10 was constructed. The expression was induced by IPTG. SDS-PAGE was used to analyze the relative molecular weight and expression form of the expressed protein. The recombinant protein was purified by ion exchange chromatography. The antibacterial activity was determined by cup-disc method. Results the 1454bp gp10 gene fragment was amplified by PCR. Double enzyme digestion and sequencing proved that the recombinant plasmid PET32a-gp10 was constructed correctly. SDS-PAGE showed that the relative molecular weight of the expressed protein was about 54.8 KD, which was consistent with the expectation. Objective protein was expressed in supernatant, supernatant and precipitate of broken bacteria, and the homogeneity of purified protein was up to 90. The inhibitory ring of recombinant protein on mycobacterium abscess was determined by cup-disc method. There is no bacteriostasis ring to Staphylococcus aureus. Conclusion: recombinant Mycobacterium bacteriophage D29 lyase gp10 has obvious inhibitory effect on mycobacterium abscess and provides a new pathway for the treatment of mycobacterium abscess infection.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1443337