發(fā)布時間：2018-01-19 03:13

  本文關(guān)鍵詞： Velocimouse技術(shù) 基因修飾小鼠 胚胎干細(xì)胞 誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的利用Velocimouse技術(shù)原代（F0）培育完全來源于胚胎干細(xì)胞的小鼠（F0-ESC小鼠），分析探討該技術(shù)的相應(yīng)技術(shù)細(xì)節(jié)，以便為胚胎干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的鑒定和基因修飾小鼠制備等生命科學(xué)研究提供更為便捷、有效的技術(shù)平臺。 方法通過顯微注射將10～15個G1-ESCs注入到野生型ICR小鼠的8細(xì)胞胚胎，轉(zhuǎn)至KSOM+AA培養(yǎng)液滴中體外培養(yǎng)48h后置熒光顯微鏡下觀察，計數(shù)囊胚率、胚胎干細(xì)胞嵌合體囊胚率和胚胎干細(xì)胞純合子囊胚率。部分顯微注射后的8-細(xì)胞胚胎置KSOM+AA培養(yǎng)液滴中體外培養(yǎng)2h后移植至假孕0.5d的野生型ICR雌鼠的輸卵管內(nèi)或者培養(yǎng)過夜后移植至假孕2.5d的野生型ICR雌鼠的子宮內(nèi)。產(chǎn)出小鼠后藍(lán)光激發(fā)下觀察，全身均為綠色熒光且毛色為黑色的初步判斷為ESC小鼠。將ESC小鼠與野生型ICR小鼠交配，根據(jù)其后代（F1）熒光觀察及毛色判定ESC小鼠是否為生殖腺傳遞。解剖ESC小鼠，，觀察各器官熒光狀況判斷其全身器官是否均為胚胎干細(xì)胞細(xì)胞發(fā)育而來最終確定其是否為F0-ESC小鼠。 結(jié)果（1）顯微注射后體外培養(yǎng)至囊胚，熒光顯微鏡檢查表明18.54%的囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)完全由G1-ESC形成；（2）培育出3只原代含有G1-ESC的小鼠，其中1只為F0-ESC小鼠（雄性），2只嵌合體小鼠；（3）將F0-ESC小鼠與野生型ICR雌鼠交配證實其為生殖腺傳遞；（4）F0-ESC小鼠各器官取材熒光觀察發(fā)現(xiàn)各器官均有熒光證實其為全身均為ES細(xì)胞發(fā)育而來的F0-ESC小鼠。 結(jié)論Velocimouse技術(shù)能有效的獲得原代胚胎干細(xì)胞小鼠，為胚胎干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的鑒定和基因修飾小鼠制備等生命科學(xué)研究提供了更為便捷、有效的方法。本實驗室建立的G1-ESC為具有可靠多能性的優(yōu)良胚胎干細(xì)胞株。
[Abstract]:The purpose of the use of Velocimouse Technology (F0) to foster a complete primary embryonic stem cells derived from mice (F0-ESC mice), analysis the technical details of the technology, so that the embryo stem cells, induced pluripotent stem cells and identification of gene modified mice, preparation of life science research and provide a more convenient and effective technology platform.
Methods by microinjection of 10 ~ 15 G1-ESCs into the 8 cell embryos of wild-type ICR mice, to KSOM+AA cultured in vitro under fluorescence microscope 48h post droplet, counting the blastocyst rate of embryonic stem cells, chimeric blastocyst rate and blastocyst rate. Embryonic stem cells homozygous for 8- cell embryos after microinjection of the part KSOM+AA cultured in 2h after transplantation to drop 0.5d pseudopregnant wild type ICR female rats in the oviduct or uterine transplantation to cultivation of wild type ICR 2.5D pseudopregnant female rats after overnight. After mice were observed under blue light excitation output, the whole body are green fluorescent color and black ESC preliminary judgment mice. ESC mice and wild-type ICR mice mated according to their offspring (F1) fluorescence observation and color to determine whether transmission ESC mouse gonads. Anatomy of ESC mice, observe the fluorescence in the systemic organ organ judgment Whether or not the embryonic stem cell cells are developed to determine whether they are F0-ESC mice.
Results (1) after microinjection and embryos cultured in vitro, fluorescence microscopy showed that 18.54% blastocyst inner cell mass was formed by G1-ESC; (2) developed 3 primary containing G1-ESC mice, 1 of which only F0-ESC mice (male), 2 chimeric mice; (3) F0-ESC mice and wild type ICR female mating was confirmed germline transmission; (4) the organs of F0-ESC mice were observed by fluorescence fluorescence confirmed that the organs of the body are developed to ES cells in F0-ESC mice.
Conclusion Velocimouse can effectively obtain primary mouse embryonic stem cells, embryonic stem cell, induced pluripotent stem cells and identification of gene modified mice, preparation of life science research provides a more convenient and effective method. The laboratory established G1-ESC has excellent reliability of embryonic stem cell lines.

【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R329

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本文編號：1442380