本文關(guān)鍵詞： 圣路易斯腦炎病毒 假病毒 陽(yáng)性質(zhì)控品　出處：《軍事醫(yī)學(xué)》2017年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的制備含有圣路易斯腦炎病毒(SLEV)pr M基因片段的假病毒顆粒,旨在提供安全、可靠、穩(wěn)定的核酸陽(yáng)性質(zhì)控品。方法根據(jù)armored RNA技術(shù)原理,構(gòu)建攜帶含有SLEV prM基因片段的重組質(zhì)粒pSE380-MS2-SLEV,轉(zhuǎn)化大腸桿菌后利用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),三氯甲烷法純化后利用透射電鏡觀察重組假病毒顆粒形態(tài)。通過DNaseⅠ和RNase A雙酶消化實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)重組假病毒顆粒的核酸酶耐受性,并結(jié)合溫度敏感性實(shí)驗(yàn)分析假病毒顆粒中核酸片段的穩(wěn)定性。利用熒光定量RT-PCR法對(duì)該假病毒顆粒進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果 PCR擴(kuò)增和測(cè)序分析顯示,pr M基因片段正確克隆至載體p SE380-MS2。經(jīng)大腸桿菌表達(dá)可形成直徑約為25 nm的均一、球形重組假病毒顆粒。核酸酶消化和溫度敏感性實(shí)驗(yàn)表明假病毒樣顆粒包裝的病毒核酸能耐受核酶的降解,37℃條件下存放20 d仍保持穩(wěn)定。熒光定量RT-PCR檢測(cè)該假病毒顆粒檢測(cè)限可達(dá)1.8×103拷貝/ml,且與同屬的其他病毒無(wú)交叉反應(yīng)。結(jié)論成功構(gòu)建了含有SLEV prM基因片段的假病毒顆粒,具有良好的核酸酶耐受性和穩(wěn)定性,可作為核酸陽(yáng)性質(zhì)控品對(duì)核酸提取與檢測(cè)過程進(jìn)行全程監(jiān)控。
[Abstract]:Objective to prepare pseudoviral particles containing SLEVPR M gene fragment of St. Louis Encephalitis virus (St Louis Encephalitis virus) in order to provide safety and reliability. Methods according to the principle of armored RNA technique, the recombinant plasmid pSE380-MS2-SLEV containing SLEV prM gene fragment was constructed. The expression of E. coli was induced by IPTG. The morphology of recombinant pseudovirus particles was observed by transmission electron microscope after purification by trichloromethane method. The nuclease tolerance of recombinant pseudovirus particles was evaluated by DNase 鈪，

本文編號(hào)：1442214