本文關(guān)鍵詞：不同細(xì)胞系表達(dá)的抗EGFR單抗糖基化結(jié)構(gòu)對(duì)比分析　出處：《生物工程學(xué)報(bào)》2017年06期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) 糖基化 α半乳糖 免疫原性

【摘要】：真核表達(dá)系統(tǒng)造就了單克隆抗體藥物的廣泛異質(zhì)性,這些異質(zhì)性通常是由翻譯后修飾引起,而糖基化修飾則是關(guān)鍵的翻譯后修飾,其對(duì)治療性蛋白的安全性和有效性有著深遠(yuǎn)的影響,為探索細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的改變對(duì)單抗糖基化所帶來(lái)的影響,應(yīng)用液相色譜-電噴霧離子化四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(LC-ESI-Q-Tof),通過(guò)交替高低碰撞能量掃描、源內(nèi)誘導(dǎo)解離及二級(jí)質(zhì)譜的方法從釋放的寡聚糖水平研究聚糖結(jié)構(gòu),對(duì)比分析由兩種不同細(xì)胞系制備的抗表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)單抗,然后結(jié)合外切糖苷酶逐級(jí)消化的方法對(duì)兩種蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)作進(jìn)一步確證分析。分析結(jié)果表明,在Fc區(qū)域的糖基化修飾,兩種表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的該抗體未發(fā)生明顯的改變,而在Fab區(qū)域,由小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0制備的抗EGFR單抗的聚糖結(jié)構(gòu)中含有大量α半乳糖(α-Gal),且末端唾液酸形式主要是N-羥乙基神經(jīng)氨酸(NGNA),具有極高的免疫原性風(fēng)險(xiǎn)。而通過(guò)中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞CHO表達(dá)系統(tǒng)制備的抗EGFR單抗Fab區(qū)域聚糖結(jié)構(gòu)中不含有α-Gal,且末端唾液酸形式主要是N乙酰神經(jīng)氨酸(NANA),免疫原性風(fēng)險(xiǎn)極大降低。本研究在一定程度上可以預(yù)測(cè)由CHO表達(dá)系統(tǒng)制備的抗EGFR單抗具備較好的臨床耐受性,超敏反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)低,CHO細(xì)胞可以作為該抗體改良型生物類似藥(Biobetter)的優(yōu)選表達(dá)系統(tǒng)。
[Abstract]:Eukaryotic expression systems have created a wide range of heterogeneity of monoclonal antibody drugs. These heterogeneity is usually caused by post-translational modification, while glycosylation is the key posttranslational modification. It has a profound effect on the safety and efficacy of therapeutic proteins, and it is important to explore the effect of the change of cell expression system on the glycosylation of monoclonal antibodies. Liquid chromatography-electrospray ionization quadrupole time-of-flight mass spectrometry (TTOMS) technique was used to scan LC-ESI-Q-TofU by alternating high and low collision energy. In vitro induced dissociation and secondary mass spectrometry were used to study the structure of polysaccharide at the level of released oligosaccharides, and to compare and analyze the EGFR monoclonal antibodies prepared from two different cell lines. The sugar chain structure of the two proteins was further confirmed and analyzed by the method of exoglucosidase step by step digestion. The results showed that the glycosylation modification in FC region. The antibody expressed by the two expression systems did not change significantly, but in the Fab region. A large number of 偽 -galactose (偽 -galactose) were found in the polysaccharide structure of anti-#en1# monoclonal antibody prepared from mouse myeloma cell line SP2/0. The main form of terminal sialic acid is N-hydroxyethyl neuraminic acid (NGNA). There is a high risk of immunogenicity, but 偽 -Gal is not found in the Fab region of anti EGFR monoclonal antibody prepared by CHO expression system of Chinese hamster ovary cells. The main form of terminal sialic acid is N-acetylneuraminic acid (NANAA). The immunogenicity risk is greatly reduced. To some extent, this study can predict that anti-#en1# monoclonal antibody prepared by CHO expression system has better clinical tolerance, and the risk of hypersensitivity reaction is low. CHO cells can be used as a selective expression system for the modified bioanalogues of the antibody.
【作者單位】： 上海藥品審評(píng)核查中心;抗體藥物與靶向治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：研發(fā)公共服務(wù)平臺(tái)(No.16DZ2292900) 產(chǎn)學(xué)研醫(yī)(No.16DZ1910400) 科學(xué)儀器領(lǐng)域(No.16142201700) 企業(yè)國(guó)際合作項(xiàng)目(No.16430730400) 上海市生物醫(yī)藥領(lǐng)域科技支撐項(xiàng)目(Nos.16431904100,16431901200,16431904700) 上海青年科技啟明星項(xiàng)目(No.16QB1404300)資助~~
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： Received:February 26,2017;Accepted:April 6,2017Supported by:RD Public Service Platform(No.16DZ2292900),Industry School Research Medicine(No.16DZ1910400),ScientificInstrument Field(No.16142201700),Enterprise International Cooperation Projects(No.16430730

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉瀛;湯仁仙;付琳琳;孔德龍;;McAb制備及其表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年01期

2 趙紅,汪承亞,段宇,P.H.Steenbergh,J.S.Sussenbach,陳家偉;利用Bac-to-Bac表達(dá)系統(tǒng)高效表達(dá)胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年03期

3 韓煥興,陸慧琦,鄭大勇,葉偉民,朱燁,羅榮城;人源抗-HBs Fab表達(dá)系統(tǒng)的轉(zhuǎn)換與效果[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年12期

4 秦鄂德;甲病毒表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;1996年03期

5 楊英超;韓靜;辛?xí)苑?王國(guó)治;葉嗣穎;;惡性瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白在無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)及純化研究[J];藥物分析雜志;2011年07期

6 閻海;肖波;馬大龍;;T7RNA聚合酶/啟動(dòng)子系統(tǒng)在原核和真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中的應(yīng)用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));1992年04期

7 曹勇,李淑琴,張兆山,文立民;抑瘤素-M(OSM)在原核系統(tǒng)中的表達(dá)[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;1998年02期

8 朱忠生;王立生;曾位森;張定國(guó);付丹;;雙歧桿菌質(zhì)粒聚合酶基因表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建及其鑒定[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2013年11期

9 狄凱軍,向明明,劉世廣,章靜波;BL21(DE3)/PET-28作為人IL-6表達(dá)系統(tǒng)的研究[J];解剖學(xué)報(bào);1997年02期

10 公茂凱，章靜波，劉德培，，張世馥，劉丕旭，董敏;BL21（DE_3）／PET－11做為人IL－2表達(dá)系統(tǒng)的研究[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);1996年01期

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 李研;Cyto Genix公司的單鏈DNA表達(dá)系統(tǒng)問(wèn)世[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 來(lái)大志;CHO表達(dá)系統(tǒng)的遺傳改造[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 馬春路;產(chǎn)3-羥基丙酸肺炎克雷伯氏菌基因表達(dá)調(diào)控元件的研究[D];北京化工大學(xué);2016年

本文編號(hào)：1384645