本文關(guān)鍵詞：不同細(xì)胞系表達(dá)的抗EGFR單抗糖基化結(jié)構(gòu)對比分析　出處：《生物工程學(xué)報》2017年06期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) 糖基化 α半乳糖 免疫原性

【摘要】：真核表達(dá)系統(tǒng)造就了單克隆抗體藥物的廣泛異質(zhì)性,這些異質(zhì)性通常是由翻譯后修飾引起,而糖基化修飾則是關(guān)鍵的翻譯后修飾,其對治療性蛋白的安全性和有效性有著深遠(yuǎn)的影響,為探索細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的改變對單抗糖基化所帶來的影響,應(yīng)用液相色譜-電噴霧離子化四極桿飛行時間質(zhì)譜技術(shù)(LC-ESI-Q-Tof),通過交替高低碰撞能量掃描、源內(nèi)誘導(dǎo)解離及二級質(zhì)譜的方法從釋放的寡聚糖水平研究聚糖結(jié)構(gòu),對比分析由兩種不同細(xì)胞系制備的抗表皮生長因子受體(EGFR)單抗,然后結(jié)合外切糖苷酶逐級消化的方法對兩種蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)作進(jìn)一步確證分析。分析結(jié)果表明,在Fc區(qū)域的糖基化修飾,兩種表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的該抗體未發(fā)生明顯的改變,而在Fab區(qū)域,由小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0制備的抗EGFR單抗的聚糖結(jié)構(gòu)中含有大量α半乳糖(α-Gal),且末端唾液酸形式主要是N-羥乙基神經(jīng)氨酸(NGNA),具有極高的免疫原性風(fēng)險。而通過中國倉鼠卵巢細(xì)胞CHO表達(dá)系統(tǒng)制備的抗EGFR單抗Fab區(qū)域聚糖結(jié)構(gòu)中不含有α-Gal,且末端唾液酸形式主要是N乙酰神經(jīng)氨酸(NANA),免疫原性風(fēng)險極大降低。本研究在一定程度上可以預(yù)測由CHO表達(dá)系統(tǒng)制備的抗EGFR單抗具備較好的臨床耐受性,超敏反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險低,CHO細(xì)胞可以作為該抗體改良型生物類似藥(Biobetter)的優(yōu)選表達(dá)系統(tǒng)。
[Abstract]:Eukaryotic expression systems have created a wide range of heterogeneity of monoclonal antibody drugs. These heterogeneity is usually caused by post-translational modification, while glycosylation is the key posttranslational modification. It has a profound effect on the safety and efficacy of therapeutic proteins, and it is important to explore the effect of the change of cell expression system on the glycosylation of monoclonal antibodies. Liquid chromatography-electrospray ionization quadrupole time-of-flight mass spectrometry (TTOMS) technique was used to scan LC-ESI-Q-TofU by alternating high and low collision energy. In vitro induced dissociation and secondary mass spectrometry were used to study the structure of polysaccharide at the level of released oligosaccharides, and to compare and analyze the EGFR monoclonal antibodies prepared from two different cell lines. The sugar chain structure of the two proteins was further confirmed and analyzed by the method of exoglucosidase step by step digestion. The results showed that the glycosylation modification in FC region. The antibody expressed by the two expression systems did not change significantly, but in the Fab region. A large number of 偽 -galactose (偽 -galactose) were found in the polysaccharide structure of anti-#en1# monoclonal antibody prepared from mouse myeloma cell line SP2/0. The main form of terminal sialic acid is N-hydroxyethyl neuraminic acid (NGNA). There is a high risk of immunogenicity, but 偽 -Gal is not found in the Fab region of anti EGFR monoclonal antibody prepared by CHO expression system of Chinese hamster ovary cells. The main form of terminal sialic acid is N-acetylneuraminic acid (NANAA). The immunogenicity risk is greatly reduced. To some extent, this study can predict that anti-#en1# monoclonal antibody prepared by CHO expression system has better clinical tolerance, and the risk of hypersensitivity reaction is low. CHO cells can be used as a selective expression system for the modified bioanalogues of the antibody.
【作者單位】： 上海藥品審評核查中心;抗體藥物與靶向治療國家重點實驗室;
【基金】：研發(fā)公共服務(wù)平臺(No.16DZ2292900) 產(chǎn)學(xué)研醫(yī)(No.16DZ1910400) 科學(xué)儀器領(lǐng)域(No.16142201700) 企業(yè)國際合作項目(No.16430730400) 上海市生物醫(yī)藥領(lǐng)域科技支撐項目(Nos.16431904100,16431901200,16431904700) 上海青年科技啟明星項目(No.16QB1404300)資助~~
【分類號】：R392
【正文快照】： Received:February 26,2017;Accepted:April 6,2017Supported by:RD Public Service Platform(No.16DZ2292900),Industry School Research Medicine(No.16DZ1910400),ScientificInstrument Field(No.16142201700),Enterprise International Cooperation Projects(No.16430730

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