本文關(guān)鍵詞：小鼠STING基因啟動(dòng)子的克隆鑒定及功能初步分析　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2016年07期 　論文類(lèi)型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 干擾素基因刺激因子(STING) 啟動(dòng)子 轉(zhuǎn)錄調(diào)控

【摘要】：目的 :克隆小鼠干擾素基因刺激因子(STING)基因啟動(dòng)子,并對(duì)其啟動(dòng)子活性和轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制進(jìn)行初步探討。方法 :利用PCR方法擴(kuò)增小鼠STING基因5′上游1 005 bp(-927~+77)的片段,亞克隆至p GL3-basic質(zhì)粒,然后通過(guò)步移缺失構(gòu)建不同缺失片段的重組質(zhì)粒。雙熒光素酶報(bào)告活性分析檢測(cè)重組質(zhì)粒在NIH3T3中的活性,并利用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。結(jié)果:經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定,成功構(gòu)建了小鼠STING啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒。與p GL3-basic質(zhì)粒相比,STING啟動(dòng)子重組質(zhì)粒的相對(duì)熒光素酶活性增加(P0.05)。通過(guò)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)小鼠STING啟動(dòng)子區(qū)域(-177~-48)可能含有GATA、IK2、MZF1、SP1/SP3、STAT等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。結(jié)論:成功構(gòu)建小鼠STING不同缺失片段的啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒。通過(guò)活性比較,推測(cè)小鼠STING的核心啟動(dòng)子區(qū)位于-177~+77區(qū)域,其中可能含有多個(gè)潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合序列。
[Abstract]:Objective: to clone mouse interferon gene stimulating factor (STING) gene promoter and its promoter activity and transcriptional regulation mechanisms. Methods: using PCR method to amplify mouse STING gene 5 'upstream 1005 BP (-927~+77) was cloned into P GL3-basic plasmid, then step deletion constructs different deletion the recombinant plasmid. The recombinant plasmid in NIH3T3 activity detection analysis of dual luciferase activity, and the use of bioinformatics to predict transcription factor binding sites methodology. Results: identification by enzyme digestion, sequencing, successfully constructed the mouse STING promoter luciferase reporter plasmids. Compared with the P GL3-basic plasmid, the relative luciferase activity increased the STING promoter (P0.05). The recombinant plasmid was predicted by bioinformatics software in the promoter region of STING (-177~-48) may contain GATA, IK2, MZF1, SP1/SP3, STAT Transcription factor binding sites. Conclusion: the recombinant plasmid gene promoter luciferase reporter construct mouse STING different deletion fragments. The activity of STING in mice, speculated that the core promoter region in the -177~+77 region, which may contain several potential transcription factor binding sequences.

【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科;南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(81302531) 江蘇省自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目(BK20131018)
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 固有免疫又稱(chēng)天然免疫,對(duì)于快速識(shí)別病原體感染,產(chǎn)生Ⅰ型干擾素(interferon,IFN)以及其他相關(guān)細(xì)胞分子,建立有效的宿主防御機(jī)制非常重要[1]。病原體入侵機(jī)體后,病毒核酸、細(xì)菌表面的復(fù)合物(如脂多糖、鞭毛蛋白)、ds RNA/RNA等作為保守的病原相關(guān)分子模式(pathogen associated

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