本文關(guān)鍵詞：鼠源抗煙曲霉單鏈抗體庫制備及鑒定　出處：《中國公共衛(wèi)生》2016年11期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 單鏈抗體(scFv) 噬菌體表達(dá)文庫 煙曲霉 半乳甘露聚糖(GM)

【摘要】：目的構(gòu)建鼠源抗曲霉菌單鏈抗體(sc Fv)噬菌體展示文庫并進(jìn)行初步鑒定,為制備用于侵襲性曲霉感染實(shí)驗(yàn)室診斷的特異性抗體提供新的方法。方法利用噬菌體展示技術(shù)構(gòu)建鼠源抗煙曲霉半乳甘露聚糖(GM)Sc Fv庫,經(jīng)過4輪"吸附-洗脫-擴(kuò)增"淘選富集,隨機(jī)挑選克隆進(jìn)行可變區(qū)基因測序確定文庫多樣性,并用phageELISA篩選煙曲霉特異性結(jié)合的克隆。結(jié)果構(gòu)建的sc Fv噬菌體表達(dá)文庫,庫容量約為1.8×107;經(jīng)4輪富集篩選,洗脫的表達(dá)sc Fv噬菌體滴度漸增;隨機(jī)挑選出4輪篩選后的20個克隆,其可變區(qū)基因序列不同;隨機(jī)挑選出4輪篩選后的90個克隆,其中6個克隆與煙曲霉GM特異性結(jié)合,而與對照的白假絲酵母菌無結(jié)合。結(jié)論構(gòu)建并初步鑒定了抗曲霉菌單鏈抗體庫,庫容量大,VH和VL區(qū)具備多樣性;篩選的sc Fv與曲霉菌GM特異性結(jié)合,提供了快速制備、篩選GM高特異性抗體分子的新方法。
[Abstract]:Objective to construct mouse anti-Aspergillus scFv phage display library and identify it preliminarily. Methods the mouse anti-Aspergillus fumigatus galactomannan (GMN) Sc FV library was constructed by phage display technique in order to prepare specific antibody for laboratory diagnosis of invasive Aspergillus fumigatus infection. After four rounds of "adsorption-eluation-amplification" enrichment, random selection of clones for variable region gene sequencing to determine the diversity of the library. The specific binding clones of Aspergillus fumigatus were screened by phageELISA. Results the Sc Fv phage expression library was constructed with a capacity of about 1.8 脳 10 ~ 7; After four rounds of enrichment and screening, the phage titers of eluting expression sc-Fv increased gradually. After 4 rounds of screening, 20 clones were randomly selected and their variable region gene sequences were different. 90 clones were randomly selected after 4 rounds of screening, of which 6 clones were specifically bound to Aspergillus fumigatus GM, but not to the control Candida albicans. Conclusion A single chain antibody library against Aspergillus fumigatus was constructed and preliminarily identified. The VH and VL regions of large reservoir capacity have diversity. The screened sc FV binds specifically to Aspergillus GM and provides a new method for rapid preparation and screening of GM highly specific antibody molecules.
【作者單位】： 沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;遼寧省環(huán)境污染與微生態(tài)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：遼寧省科學(xué)事業(yè)公益研究基金(GY2014-A-007) 沈陽市科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目計(jì)劃(F14-181-1-00) 沈陽醫(yī)學(xué)院科研立項(xiàng)項(xiàng)目(20141022)
【分類號】：R379
【正文快照】： Tw enty clones w ith different gene sequence of variable region w ere randomly selected after 4 rounds of panning.The di-versity of VH and VL w as confirmed in the single chain antibody library.Ninety clones w ere tested for binding specificityto Aspergi

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