本文關(guān)鍵詞：1，25-二羥基維生素D3對HaCaT細胞microRNAs表達譜的影響　出處：《中南大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 1 25二羥基維生素D3 HaCaT細胞 microRNAs microRNA芯片

【摘要】：目的：高通量檢測1,25二羥基維生素D3對永生化人角質(zhì)形成細胞株HaCaT細胞microRNAs (miRNAs)表達譜的影響,篩選1,25二羥基維生素D3的作用靶點,為揭示1,25二羥基維生素D3治療銀屑病的分子機制奠定基礎(chǔ)。 方法：按照1×105個/孔密度接種HaCaT細胞于六孔板,加入含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基,5%二氧化碳培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng),待細胞融合度達70%,培養(yǎng)基中加入1,25二羥基維生素D3(10-6M),繼續(xù)培養(yǎng)48小時后,收集細胞提取細胞總RNA,利用miRNA芯片高通量篩選1,25二羥基維生素D3處理組與對照組之間miRNA表達譜差異,選取有顯著差異的(?)niRNA,利用實時定量PCR(realtime PCR)方法驗證芯片結(jié)果。 結(jié)果：miRNAs芯片結(jié)果顯示：與對照組相比,1,25二羥基維生素D3處理組中表達上調(diào)3倍及以上的miRNAs (Fold Change cut-off:3.0)共89個,表達下調(diào)3倍及以上的miRNAs共43個。其中上調(diào)最顯著的前十位miRNAs分別是：hsa-miR-340-3p、hsa-miR-2113、hsa-miR-550b-3p、hsa-miR-520d-5p、ebv-miR-BART18-3p、hsa-miR-374c-3p、has-miR-4292、hsa-miR-488-3p、hsa-miR-221-5p、hsa-miR-668;下調(diào)最顯著的前十位miRNAs分別是hsa-miR-331-3p、hsa-miR-429、hsa-miR-15b-5p、 hsa-miR-30c-1-3p、hsa-miR-31-3p、hsa-miR-3653、hsa-miR-182-5p、 hsa-miR-339-5p、hsa-miR-181d、hsa-miR-194-3p。進一步我們選擇三個滿足以下條件的miRNAs(miR-99b-5p、miR-222-3p、miR-205-5p),即1.表達差異大于3倍,2.在銀屑病患者皮損組織中異常表達,采用realtimePCR驗證芯片檢測的可靠性。PCR結(jié)果顯示：與對照組相比,1,25二羥基維生素D3處理組中miR-99b-5b表達顯著升高(約2.37倍),miR-222-3p和miR-205-5p表達水平顯著降低(分別約3.05和約4.85倍),與芯片檢測結(jié)果一致,表明芯片結(jié)果具有一定的可靠性。 結(jié)論：1,25二羥基維生素D3可調(diào)控角質(zhì)形成細胞HaCaT細胞株中大量miRNAs表達。miR-99b-5p、miR-222-3p及(?)niR-205-5p可能是1,25二羥基維生素D3作用的靶點。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of 1m25 dihydroxyvitamin D3 on the expression profile of immortalized human keratinocytes HaCaT cell line microRNAs miRNAs. The target of 25-dihydroxyvitamin D _ 3 provides a basis for revealing the molecular mechanism of 1-dihydroxyvitamin D _ 3 in the treatment of psoriasis. Methods: HaCaT cells were inoculated on six-well plate according to 1 脳 105 / well density and cultured at 37 鈩，

本文編號：1373903