本文關(guān)鍵詞：霍亂弧菌LysR家族基因vc2103的功能及其調(diào)控基因的研究　出處：《南京農(nóng)業(yè)大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：霍亂是一種古老且流行廣泛的急性腸道感染疾病,革蘭氏陰性細(xì)菌霍亂弧菌是引起霍亂的病原細(xì)菌。大量的研究表明,霍亂弧菌的致病能力主要是由霍亂毒素和毒素共調(diào)節(jié)菌毛引起的。 LysR轉(zhuǎn)錄調(diào)控家族是一類被深入研究的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,高度保守且普遍存在于細(xì)菌各種屬中,組成了已知原核生物中最大的DNA結(jié)合蛋白家族,它所調(diào)控的目標(biāo)基因也多樣,在生物代謝,細(xì)胞分裂,群體感應(yīng),毒力,游動性,固氮,毒素產(chǎn)生,黏附及分泌等方面都發(fā)現(xiàn)有LysR型轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白的參與。其中大部分的LysR基因具有分支狀的啟動子,并且通過這種結(jié)構(gòu)在激活其目標(biāo)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的同時抑制自身的轉(zhuǎn)錄。借助于生物信息學(xué)知識,我們發(fā)現(xiàn)霍亂弧菌中約有40個LysR型蛋白。本實驗以霍亂弧菌LysR家族基因vc2103作為研究對象。 首先通過構(gòu)建冷光檢測菌株研究vc2103的調(diào)控模式,研究發(fā)現(xiàn)：LysR家族基因vc2103不但可以抑制自身的表達(dá)而且還可以在醋酸的誘導(dǎo)下激活基因vc2101(胞壁質(zhì)水解酶調(diào)控因子)的表達(dá)。 通過框內(nèi)敲除的方法分別構(gòu)建vc2103缺失菌株以及vc2100和vc2101缺失的菌株。研究發(fā)現(xiàn)vc2103缺失以及vc2100和vc2101缺失并不影響霍亂弧菌的生長,但是在醋酸存在的情況下,野生型菌株和vc2103缺失的菌株在菌株生長的中后期較未加醋酸的衰亡快;通過Western blot以及乳鼠腸道定殖實驗結(jié)果表明：vc2103缺失后霍亂弧菌毒力基因的表達(dá)以及定殖能力并沒有受到影響,說明vc2103與霍亂弧菌的毒力沒有關(guān)系；在醋酸存在情況下,野生型菌株和vc2103缺失的菌株較無醋酸的時候?qū)Ｆ降目剐杂兴档汀?當(dāng)vc2103下游基因vc2100和vc2101缺失后,突變株對利福平的抗性較野生型菌株顯著的增強(qiáng),在醋酸存在情況下,野生型菌株較無醋酸的時候?qū)Ｆ降目剐越档?但vc2100和vc2101缺失突變株對利福平的敏感性沒有太大的差異,結(jié)果表明vc2100和vc2101能夠降低菌株對利福平的抗性；通過對細(xì)胞外的胞壁質(zhì)水解酶表達(dá)情況的檢測,實驗結(jié)果初步顯示vc2100和vc2101的缺失會影響細(xì)胞外的胞壁質(zhì)水解酶的正常表達(dá)。
[Abstract]:Cholera is an ancient and widespread acute intestinal infection disease. Vibrio cholerae, a gram-negative bacterium, is the cause of cholera. The pathogenicity of Vibrio cholerae is mainly caused by the coregulation of cholera toxin and toxin. LysR transcriptional regulation family is a kind of transcription regulator which has been studied deeply. It is highly conserved and ubiquitous in various genera of bacteria. It forms the largest DNA binding protein family in prokaryotes. It also regulates a variety of target genes in biological metabolism, cell division, colony sensing, virulence, swimming, nitrogen fixation, and toxin production. LysR type transcriptional regulatory proteins were found to be involved in adhesion and secretion. Most of the LysR genes had branched promoters. And this structure activates the transcription expression of its target gene and inhibits its own transcription with the help of bioinformatics knowledge. We found that there were about 40 LysR type proteins in Vibrio cholerae. In this study, vc2103 gene of LysR family of Vibrio cholerae was used as the research object. Firstly, the regulation mode of vc2103 was studied by constructing cold-light detection strain. It was found that vc2103 could not only inhibit its own expression but also activate the expression of vc2101 (cytosolic hydrolase regulatory factor) induced by acetic acid. The vc2103 deletion strain and the vc2100 and vc2101 deletion strain were constructed by the method of box knockout. The vc2103 deletion and vc2100 and vc21 were found in the study. The deletion did not affect the growth of Vibrio cholerae. However, in the presence of acetic acid, wild-type strains and vc2103 deficient strains declined faster in the middle and late stage of growth than those without acetic acid. The results of Western blot and intestinal colonization test showed that the virulence gene expression and colonization ability of Vibrio cholerae were not affected after the deletion of 1: vc2103. The results showed that vc2103 had no relationship with virulence of Vibrio cholerae. In the presence of acetic acid, the resistance of wild-type strains and vc2103 deficient strains to rifampicin was lower than that without acetic acid. When the downstream genes of vc2103 vc2100 and vc2101 were deleted, the resistance of the mutant to rifampicin was significantly higher than that of the wild-type strain, in the presence of acetic acid. The resistance of wild-type strains to rifampicin was lower than that without acetic acid, but the sensitivity of vc2100 and vc2101 deletion mutants to rifampicin was not significantly different. The results showed that vc2100 and vc2101 could reduce the resistance to rifampicin. By detecting the expression of extracellular cytoplasmic hydrolase, the results showed that the absence of vc2100 and vc2101 could affect the normal expression of extracellular wall hydrolase.
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R346

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本文編號：1367104