本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)干細胞相關(guān)抗原在SD大鼠腦及O-2A譜系細胞的表達研究　出處：《蘇州大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：第一部分神經(jīng)干細胞相關(guān)抗原在SD大鼠腦組織的表達 目的觀察分析NG2、CD15與nestin在不同時期SD大鼠腦組織中的表達變化情況。 方法將出生后7天和3個月的兩組SD大鼠麻醉后進行灌注、固定、取腦，4%多聚甲醛后固定4小時后入10%、20%蔗糖脫水后，依照徐州醫(yī)學院王平宇編著的《大鼠腦讀片提要及圖譜》進行冰凍切片。對神經(jīng)干細胞相關(guān)抗原（nestin，CD15，NG2）和O-2A譜系特異性標記物A2B5分別進行免疫熒光組織化學染色研究，觀察表達差異。 結(jié)果7天組和3個月組的腦組織中，腦皮質(zhì)和腦髓質(zhì)中幾乎觀察不到nestin和CD15陽性細胞，而在SVZ和海馬齒狀回附近集中表達，表達量隨著鼠齡的增長略微有些減少；NG2在不同腦區(qū)均有發(fā)現(xiàn)，與早期腦組織不同的是，成熟的腦組織在室管膜下區(qū)NG2表達減少，而在SVZ區(qū)周圍的實質(zhì)部分大量表達NG2。 結(jié)論神經(jīng)干細胞發(fā)育過程中會向腦組織周邊遷移，表面抗原nestin消失的最快，其次是CD15，NG2發(fā)育過程中消失的最慢或者不消失。 第二部分神經(jīng)干細胞相關(guān)抗原在O-2A譜系膠質(zhì)細胞中的表達 目的觀察分析神經(jīng)干細胞相關(guān)抗原NG2、CD15與nestin在O-2A譜系膠質(zhì)細胞中的表達變化情況。 方法根據(jù)O-2A譜系細胞的生長時間差異及細胞的粘附特性不同，采用振蕩法和差速貼壁法，并結(jié)合使用含生長因子的無血清培養(yǎng)基以獲得純化的O-2A祖細胞，將O-2A祖細胞用生長因子培養(yǎng)基誘導分化為T2A后，對培養(yǎng)1d和2d的O-2A和培養(yǎng)純化1d和3d的T2A分別進行nestin，CD15，NG2和A2B5的免疫熒光檢測。 結(jié)果nestin在OPC（1d,2d）表達較強，在T2A培養(yǎng)早期（1d）也有表達但已稍減少（僅有70-80%表達），，在T2A分化成熟階段（3d后）幾乎不見nestin表達。同樣，CD15在OPC比T2A表達強，但有意思的是，在分化成熟的T2A中CD15雖表達減少但并未完全不表達。NG2在O-2A譜系（OPC、T2A）中均有較強表達。 結(jié)論O-2A譜系膠質(zhì)細胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中，其神經(jīng)干細胞標記物的表達，隨著細胞由未成熟至成熟狀態(tài)而逐漸減弱，但不同神經(jīng)干細胞標記物之間表達規(guī)律有差異。
[Abstract]:The first part of the expression of neural stem cell related antigen in the brain of SD rats Objective to observe and analyze the expression of NG2 + CD15 and nestin in the brain of SD rats at different stages. Methods Sprague-Dawley rats were anesthetized for 7 days and 3 months after birth. The rats were fixed with 4% paraformaldehyde and 10% 20% sucrose after dehydration. According to Wang Pingyu of Xuzhou Medical College, we made frozen sections of the brain of rats and made CD15 on neural stem cell-related antigens (NSC-related antigens). NG2) and O-2A lineage specific marker A2B 5 were studied by immunofluorescence histochemical staining to observe the difference of expression. Results there were almost no nestin and CD15 positive cells in cerebral cortex and medulla in 7-day and 3-month groups, but they were expressed in the vicinity of SVZ and hippocampal dentate gyrus. The expression level decreased slightly with the aging of mice. NG2 was found in different brain regions. The expression of NG2 in mature brain tissues was decreased in subependymal area, but NG2 was expressed in the parenchyma around SVZ area. Conclusion the neural stem cells migrate to the periphery of brain tissue during the development of neural stem cells, and the surface antigen nestin disappears fastest, followed by the slowest or not disappearing during the development of CD15Ng2. The second part: expression of neural stem cell associated antigen in glial cells of O-2A lineage Objective to investigate the expression of NG2 + CD15 and nestin in glial cells of O-2A lineage. Methods according to the difference of growth time and adhesion characteristics of O-2A lineage cells, oscillatory method and differential adhesion method were used. The purified O-2A progenitor cells were obtained by using serum-free medium containing growth factor, and the O-2A progenitor cells were induced to differentiate into T2A by growth factor medium. The O-2A of 1 d and 2 d of culture and T2A of 1 d and 3 d of culture purification were detected by immunofluorescence of nestinine CD15, NG2 and A2B 5, respectively. Results the expression of nestin was stronger in OPC for 1 d and 1 d in the early stage of T2A culture, but decreased slightly (only 70-80%). The expression of CD15 in OPC was stronger than that in T2A, but it was interesting. The expression of CD15 in the differentiated T2A was decreased but not completely unexpressed. NG2 was strongly expressed in the O-2A lineage of OPC T2A. Conclusion during the development of the central nervous system, the expression of neural stem cell markers of O-2A lineage glial cells decreased gradually with the cells from immature to mature. But different neural stem cell markers have different expression patterns.
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R329

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本文編號：1358879