本文關鍵詞：T淋巴細胞表達CD147對單核細胞趨化和分泌MMP-9的影響　出處：《蚌埠醫(yī)學院》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：背景：慢性炎癥反應能導致動脈血管壁的損傷和內皮功能的紊亂，T淋巴細胞和單核巨噬細胞作為重要的炎癥細胞，在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的過程中起到了重要作用。T淋巴細胞高表達的CD147是否對單核細胞趨化性和MMPs的分泌有影響，CypA是否通過T細胞的表達的CD147而促進單核細胞趨化及MMPs分泌，以及CsA是否對此有抑制作用，有待進一步研究。 目的：驗證T淋巴細胞表達的CD147對單核細胞趨化和分泌MMP-9的影響，親環(huán)素A是否通過Jurkat細胞表達的CD147影響單核細胞趨化和MMP-9的表達，以及CsA是否對此有抑制作用，從而揭示動脈粥樣硬化在發(fā)生和發(fā)展中可能涉及的免疫機制，為防治動脈粥樣硬化提供新的有效的靶點。 方法：體外培養(yǎng)人Jurkat T淋巴細胞株，轉染針對CD147特異的siRNA抑制CD147在Jurkat T淋巴細胞的表達，分別從基因水平和蛋白水平驗證siRNA對CD147的抑制效率。建立體外人Jurkat T淋巴細胞和THP-1單核細胞共培養(yǎng)體系，在共培養(yǎng)前分別用親環(huán)素A和環(huán)孢素A預處理Jurkat細胞，轉染siRNA抑制CD147在Jurkat細胞的表達，親環(huán)素A預處理siRNA抑制CD147表達后的Jurkat細胞，，環(huán)孢素A預處理后再加入親環(huán)素A的Jurkat細胞；各共培養(yǎng)體系中分別共培養(yǎng)48h后收集培養(yǎng)液上清，用ELISA檢測各組中單核細胞分泌MMP-9量的變化；用Millicell趨化小室，做趨化實驗檢測上述各組共培養(yǎng)體系中不同干預條件下對單核細胞趨化性的影響。 結果：針對CD147的siRNA能特異性的抑制Jurkat T淋巴細胞CD147的表達，與對照組相比siRNA干擾組細胞表面CD147的平均熒光強度（MFI）下降（50.5±4.7）%（p0.05），CD147mRNA和蛋白水平的表達均降低，抑制率分別為（38.57±1.55）%、（47.4±1.47）%（p0.05），符合實驗要求。與正常組比較，siRNA特異性抑制CD147表達的Jurkat細胞與THP-1細胞共培養(yǎng)單核細胞分泌MMP-9量和趨化能力均明顯降低（p0.05）；親環(huán)素A刺激后的Jurkat細胞與單核細胞共培養(yǎng)體系中單核細胞分泌MMP-9量和趨化能力均明顯增加（p0.05），而加入環(huán)孢素A預處理的Jurkat細胞與THP-1單核細胞共培養(yǎng)，單核細胞分泌MMP-9量和趨化能力均降低（p0.05）；分別用親環(huán)素A刺激siRNA抑制CD147后的Jurkat T淋巴細胞和環(huán)孢素A預處理后的Jurkat T淋巴細胞后再與THP-1單核細胞共培養(yǎng)，在以上兩個共培養(yǎng)體系中單核細胞趨化和分泌MMP-9的量變化不明顯（p0.05），差異無統(tǒng)計學意義。 結論：1．化學合成的siRNA能特異性抑制Jurkat T淋巴細胞CD147基因和蛋白的表達，為下一步研究CD147在動脈粥樣硬化中的作用奠定了基礎。 2．體外成功建立Jurkat T淋巴細胞和THP-1單核細胞的共培養(yǎng)體系；抑制了CD147在Jurkat細胞上的表達可使共培養(yǎng)體系中單核細胞趨化性和MMP-9的分泌降低，說明T淋巴細胞表達的CD147可影響共培養(yǎng)體系中單核細胞趨化性和MMP-9表達的有效途徑。 3．親環(huán)素A可通過Jurkat細胞上表達的CD147對共培養(yǎng)體系中單核細胞趨化和MMP-9的分泌起作用，而環(huán)孢素A可阻斷親環(huán)素A的這一效應。
[Abstract]:Background : Chronic inflammatory reaction can lead to vascular wall injury and endothelial dysfunction , T lymphocytes and mononuclear phagocytes play an important role in the development of atherosclerosis . Objective : To verify the effect of CD147 expressed by T lymphocytes on monocyte chemoattractant and MMP - 9 secretion , and whether cyclophilin A has an inhibitory effect on monocyte chemoattractant and MMP - 9 expression via CD147 expressed in the cells , as well as whether CsA has an inhibitory effect on the expression of MMP - 9 and whether CsA can be involved in the pathogenesis and development of atherosclerosis , which can provide a new effective target for preventing and treating atherosclerosis . Methods : The CD147 - specific siRNA was cultured in vitro to inhibit CD147 expression . After co - culture , the cells were pretreated with cyclosporins A and cyclosporine A . After 48 hours of co - culture , the expression of MMP - 9 was inhibited and the expression of MMP - 9 was inhibited in each group . The effects of different intervention conditions on monocyte chemoattractant were detected by ELISA . Results : Compared with the control group , the expression of MMP - 9 and MCP - 9 decreased significantly ( P < 0.05 ) . Compared with the control group , the expression of MMP - 9 and MCP - 9 decreased significantly ( P < 0.05 ) . Compared with the control group , the amount of MMP - 9 and monocyte - secreting MMP - 9 were significantly decreased ( P < 0.05 ) . Conclusion : 1 . The chemically synthesized siRNA can specifically inhibit the expression of CD147 gene and protein , and lays a foundation for the next study on the role of CD147 in atherosclerosis . 2 . The co - culture system of T lymphocytes and THP - 1 monocytes was successfully established in vitro , and the expression of CD147 was inhibited in the co - culture system and the secretion of MMP - 9 in the co - culture system was decreased . 3 . Cyclophilin A can inhibit the secretion of monocyte chemoattractant and MMP - 9 in the co - culture system by CD147 expressed on the cells , and cyclosporin A can block the effect of cyclophilin A .

【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R363

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本文編號：1358856