本文關(guān)鍵詞：在煙草中瞬時(shí)表達(dá)人角質(zhì)細(xì)胞生長因子-1（KGF1）　出處：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：人角質(zhì)細(xì)胞生長因子-1(keratinocyte growth factor1, rhKGF1)是FGF家族重要成員之一,對(duì)多種組織的上皮細(xì)胞具有促增殖作用,因此對(duì)皮膚、角膜、膀胱、腎、肺、腸等部位上皮組織損傷具有重要的修復(fù)作用,在個(gè)體發(fā)育、腫瘤發(fā)生等方面也具有很重要的意義。獲得rhKGF1的傳統(tǒng)方法是從動(dòng)物組織中提取和在大腸桿菌中原核表達(dá),但是第一種方法產(chǎn)率低、價(jià)格昂貴,第二種方法在大腸桿菌中表達(dá)不穩(wěn)定,主要以包涵體形式表達(dá),包涵體的變復(fù)性增加了蛋白生產(chǎn)步驟,而且復(fù)性后的活性較低。本研究運(yùn)用改造后的馬鈴薯病毒X (pGR107)做載體,在煙草(Nicotiana benthamiana)中瞬時(shí)表達(dá)rhKGF1,旨在尋求一種低成本、方便、大量生產(chǎn)rhKGF1的方法。 pGR107是一種植物病毒PVX的雙元表達(dá)載體,通過農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上T-DNA將植物病毒基因組帶入傷口附近的植物細(xì)胞,隨后病毒在植株中形成系統(tǒng)擴(kuò)散。本研究中我們?nèi)hKGF1基因片段,插入經(jīng)改造的馬鈴薯病毒X (pGR107)雙元表達(dá)載體,利用凍融法轉(zhuǎn)化感受態(tài)農(nóng)桿菌GV3101,獲得的GV3101-pGR107-rhKGF1侵染煙草。以綠色熒光蛋白(smGFP)做為報(bào)告基因,建立馬鈴薯X病毒(PVX)瞬時(shí)表達(dá)體系。用紫外燈(UV Products, model B 100AP,365nm)對(duì)經(jīng)過GV3101-pGR107-smGFP侵染的煙草表達(dá)進(jìn)行連續(xù)20天的觀察,確定該表達(dá)體系侵染后的植物外源蛋白聚集量最大時(shí)間為7-9天。利用SDS-PAGE法、免疫印跡法(Western法)確定rhKGF1在煙草中成功表達(dá)。表明本實(shí)驗(yàn)成功尋求到了一種低成本、方便、大量生產(chǎn)rhKGF1的方法。 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用植物病毒表達(dá)載體首次在煙草中表達(dá)了rhKGF1蛋白,對(duì)生產(chǎn)rhKGF1蛋白具有重要意義。
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【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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2 杜小春;何正權(quán);陳磊;楊曄;姚偉;;植物生物反應(yīng)器表達(dá)藥用蛋白研究新進(jìn)展[J];中國生物工程雜志;2008年09期

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本文編號(hào)：1354827