本文關(guān)鍵詞：在煙草中瞬時表達人角質(zhì)細胞生長因子-1（KGF1）　出處：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：人角質(zhì)細胞生長因子-1(keratinocyte growth factor1, rhKGF1)是FGF家族重要成員之一,對多種組織的上皮細胞具有促增殖作用,因此對皮膚、角膜、膀胱、腎、肺、腸等部位上皮組織損傷具有重要的修復(fù)作用,在個體發(fā)育、腫瘤發(fā)生等方面也具有很重要的意義。獲得rhKGF1的傳統(tǒng)方法是從動物組織中提取和在大腸桿菌中原核表達,但是第一種方法產(chǎn)率低、價格昂貴,第二種方法在大腸桿菌中表達不穩(wěn)定,主要以包涵體形式表達,包涵體的變復(fù)性增加了蛋白生產(chǎn)步驟,而且復(fù)性后的活性較低。本研究運用改造后的馬鈴薯病毒X (pGR107)做載體,在煙草(Nicotiana benthamiana)中瞬時表達rhKGF1,旨在尋求一種低成本、方便、大量生產(chǎn)rhKGF1的方法。 pGR107是一種植物病毒PVX的雙元表達載體,通過農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上T-DNA將植物病毒基因組帶入傷口附近的植物細胞,隨后病毒在植株中形成系統(tǒng)擴散。本研究中我們?nèi)hKGF1基因片段,插入經(jīng)改造的馬鈴薯病毒X (pGR107)雙元表達載體,利用凍融法轉(zhuǎn)化感受態(tài)農(nóng)桿菌GV3101,獲得的GV3101-pGR107-rhKGF1侵染煙草。以綠色熒光蛋白(smGFP)做為報告基因,建立馬鈴薯X病毒(PVX)瞬時表達體系。用紫外燈(UV Products, model B 100AP,365nm)對經(jīng)過GV3101-pGR107-smGFP侵染的煙草表達進行連續(xù)20天的觀察,確定該表達體系侵染后的植物外源蛋白聚集量最大時間為7-9天。利用SDS-PAGE法、免疫印跡法(Western法)確定rhKGF1在煙草中成功表達。表明本實驗成功尋求到了一種低成本、方便、大量生產(chǎn)rhKGF1的方法。 本實驗應(yīng)用植物病毒表達載體首次在煙草中表達了rhKGF1蛋白,對生產(chǎn)rhKGF1蛋白具有重要意義。
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【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

【參考文獻】

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