本文關(guān)鍵詞：阿米洛利通過(guò)自噬途徑保護(hù)PC12細(xì)胞的研究　出處：《蘇州大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的: 1觀察酸處理對(duì)PC12細(xì)胞存活率、乳酸脫氫酶(LDH)漏出率、凋亡率以及胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響,并觀察阿米洛利(amiloride,Ami)對(duì)酸處理所致細(xì)胞損傷的拮抗作用; 2觀察MPP~+對(duì)PC12細(xì)胞存活率、LDH漏出率、凋亡率以及胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響,并觀察Ami對(duì)MPP~+所致細(xì)胞損傷的拮抗作用; 3分析酸處理及MPP~+對(duì)PC12細(xì)胞自噬-溶酶體通路(autophagy-lysosome pathway, ALP)的影響,并觀察Ami的拮抗作用。 方法: 分別用酸性(pH6.0)培養(yǎng)基或MPP~+處理PC12細(xì)胞24 h,同時(shí)給予Ami進(jìn)行干預(yù):MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率;LDH試劑盒檢測(cè)上清液中的LDH活性;流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和胞內(nèi)鈣離子濃度;Western blot分析LC-II、LAMP2a表達(dá)水平的變化。 結(jié)果: 1酸性培養(yǎng)液(pH6.0)處理24h,細(xì)胞存活率顯著降低(P0.001),上清液中LDH的漏出率顯著升高(P0.001),細(xì)胞凋亡率升高(P0.001),細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度也明顯升高(P0.05);100μM的Ami有效提高了細(xì)胞存活率(P0.001),降低LDH漏出率(P0.001),并抑制了細(xì)胞凋亡(P0.001)和鈣內(nèi)流(P0.01); 2 MPP~+處理24h,細(xì)胞存活率顯著降低(P0.001),上清液中LDH漏出率顯著升高(P0.001),細(xì)胞凋亡率升高(P0.05),細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度也明顯升高(P0.01);100μM的Ami有效提高了細(xì)胞存活率(P0.001),降低上清液中LDH活力(P0.001),并抑制了細(xì)胞凋亡(P0.01)和鈣內(nèi)流(P0.05); 3酸性培養(yǎng)液和MPP~+處理24 h,LC3-II的表達(dá)顯著受抑(P0.01),LAMP2a的表達(dá)水平顯著升高(P0.05);Ami顯著上調(diào)了LC3-II的表達(dá)(P0.01),并下調(diào)了LAMP2a的蛋白表達(dá)水平(P0.05)。 結(jié)論: 1. Ami對(duì)酸處理導(dǎo)致的PC12細(xì)胞損傷表現(xiàn)出良好的拮抗作用; 2. Ami對(duì)MPP~+所致PC12細(xì)胞損傷具有良好的拮抗作用; 3.酸處理及MPP~+均能導(dǎo)致PC12細(xì)胞的大自噬活性受抑制,同時(shí)分子伴侶自噬水平代償性升高,Ami能有效增強(qiáng)大自噬的活性,拮抗分子伴侶自噬的異常激活。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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2 劉康永;石際俊;倪夏s，

本文編號(hào)：1354907