本文關鍵詞：人IgE受體蛋白FcεRIα-D2的原核表達及其對IgE的選擇吸附能力研究　出處：《大連理工大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：I型變態(tài)反應是變態(tài)反應的一種,又稱速發(fā)型過敏反應,是由IgE引起的一種免疫系統(tǒng)疾病,清除過敏反應病人體內(nèi)過量的IgE對有效緩解和治療過敏反應疾病具有重要意義。目前藥物治療是治療過敏反應性疾病的主要方法,這些藥物療法對偶發(fā)性過敏反應治療效果良好,但不能治愈,且會使患者產(chǎn)生藥物依賴。由于患者體內(nèi)致敏原特異性IgE的長期存在是導致頑固性過敏癥狀不能有效改善的主要原因,因此,采用血液凈化吸附劑選擇性清除患者血液中的IgE,對于緩解病情將會有很大幫助。已有的吸附劑對IgE的選擇性吸附能力較差,且配基屬于異源蛋白,脫落容易造成人體的免疫反應。為了提高IgE吸附劑的安全性和選擇性,本研究利用人體本身的對IgE具有高選擇性的IgE受體FcεRIα為配基,制備了一種對人IgE具有良好選擇性吸附能力的吸附劑并考察其對IgE的吸附能力。本論文的研究內(nèi)容包括以下幾個部分： (1)利用基因工程技術,分別構建了重組質粒pET28a-FcsRIa-D2^pET23a-FcεRIa-D2、pCW-ori-FcεRIa-D2和pFLAG-ATS-FcεRIα-D2;考察重組質粒轉化表達宿主后對重組蛋白的表達情況,其中E.coli BL21(DE3)-pET23a-FCεRIa-D2的表達量高,達到總蛋白的30%,故將其作為重組蛋白的表達菌株；通過對菌體培養(yǎng)條件的優(yōu)化,確定了最終的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為37℃,菌體活化過夜后,1%接菌lOOmLLB培養(yǎng)基培養(yǎng)5h,加入0.2mM IPTG誘導4h后停止培養(yǎng)。 (2)重組菌株表達的重組蛋白形成了不溶性的包涵體,本文采用兩種復性方法對重組蛋白進行復性：①蛋白透析復性后,進行SEC純化,復性率達到54.5%。②利用強陰離子交換層析復性同時純化重組蛋白,復性率達到44.9%。兩種方法純化后的重組蛋白純度均達到95%,但透析復性所得的重組蛋白對IgE具有較好的結合能力,因此確定透析復性為后續(xù)重組蛋白的復性方法。得到的蛋白為可溶性單體,分子量為12.9kDa。 (3)將重組蛋白FcεRIa-D2偶聯(lián)到固相載體Sepharose CL-4B上,制得吸附劑,通過靜態(tài)吸附血清中IgE考察了重組蛋白對IgE的結合能力。制備的0.4-4mg/mL配基密度的吸附劑均能選擇性去除過敏反應病人血清中約30%的IgE,證明了重組蛋白FcεRIa-D2對過敏反應病人血液中的IgE具有顯著的選擇性吸附能力。 通過本論文的研究,原核表達并分離純化了人來源受體蛋白FcεRIa-D2,并將其作為吸附劑的配基,證明了其對人IgE的選擇性吸附能力,為利用FcεRIa-D2蛋白治療過敏性反應奠定了基礎。
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【學位授予單位】：大連理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R392.1

【參考文獻】

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本文編號：1351010