本文關(guān)鍵詞：人IgE受體蛋白FcεRIα-D2的原核表達(dá)及其對(duì)IgE的選擇吸附能力研究　出處：《大連理工大學(xué)》2012年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：I型變態(tài)反應(yīng)是變態(tài)反應(yīng)的一種,又稱速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng),是由IgE引起的一種免疫系統(tǒng)疾病,清除過(guò)敏反應(yīng)病人體內(nèi)過(guò)量的IgE對(duì)有效緩解和治療過(guò)敏反應(yīng)疾病具有重要意義。目前藥物治療是治療過(guò)敏反應(yīng)性疾病的主要方法,這些藥物療法對(duì)偶發(fā)性過(guò)敏反應(yīng)治療效果良好,但不能治愈,且會(huì)使患者產(chǎn)生藥物依賴。由于患者體內(nèi)致敏原特異性IgE的長(zhǎng)期存在是導(dǎo)致頑固性過(guò)敏癥狀不能有效改善的主要原因,因此,采用血液凈化吸附劑選擇性清除患者血液中的IgE,對(duì)于緩解病情將會(huì)有很大幫助。已有的吸附劑對(duì)IgE的選擇性吸附能力較差,且配基屬于異源蛋白,脫落容易造成人體的免疫反應(yīng)。為了提高IgE吸附劑的安全性和選擇性,本研究利用人體本身的對(duì)IgE具有高選擇性的IgE受體FcεRIα為配基,制備了一種對(duì)人IgE具有良好選擇性吸附能力的吸附劑并考察其對(duì)IgE的吸附能力。本論文的研究?jī)?nèi)容包括以下幾個(gè)部分： (1)利用基因工程技術(shù),分別構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET28a-FcsRIa-D2^pET23a-FcεRIa-D2、pCW-ori-FcεRIa-D2和pFLAG-ATS-FcεRIα-D2;考察重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主后對(duì)重組蛋白的表達(dá)情況,其中E.coli BL21(DE3)-pET23a-FCεRIa-D2的表達(dá)量高,達(dá)到總蛋白的30%,故將其作為重組蛋白的表達(dá)菌株；通過(guò)對(duì)菌體培養(yǎng)條件的優(yōu)化,確定了最終的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為37℃,菌體活化過(guò)夜后,1%接菌lOOmLLB培養(yǎng)基培養(yǎng)5h,加入0.2mM IPTG誘導(dǎo)4h后停止培養(yǎng)。 (2)重組菌株表達(dá)的重組蛋白形成了不溶性的包涵體,本文采用兩種復(fù)性方法對(duì)重組蛋白進(jìn)行復(fù)性：①蛋白透析復(fù)性后,進(jìn)行SEC純化,復(fù)性率達(dá)到54.5%。②利用強(qiáng)陰離子交換層析復(fù)性同時(shí)純化重組蛋白,復(fù)性率達(dá)到44.9%。兩種方法純化后的重組蛋白純度均達(dá)到95%,但透析復(fù)性所得的重組蛋白對(duì)IgE具有較好的結(jié)合能力,因此確定透析復(fù)性為后續(xù)重組蛋白的復(fù)性方法。得到的蛋白為可溶性單體,分子量為12.9kDa。 (3)將重組蛋白FcεRIa-D2偶聯(lián)到固相載體Sepharose CL-4B上,制得吸附劑,通過(guò)靜態(tài)吸附血清中IgE考察了重組蛋白對(duì)IgE的結(jié)合能力。制備的0.4-4mg/mL配基密度的吸附劑均能選擇性去除過(guò)敏反應(yīng)病人血清中約30%的IgE,證明了重組蛋白FcεRIa-D2對(duì)過(guò)敏反應(yīng)病人血液中的IgE具有顯著的選擇性吸附能力。 通過(guò)本論文的研究,原核表達(dá)并分離純化了人來(lái)源受體蛋白FcεRIa-D2,并將其作為吸附劑的配基,證明了其對(duì)人IgE的選擇性吸附能力,為利用FcεRIa-D2蛋白治療過(guò)敏性反應(yīng)奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1351010