本文關(guān)鍵詞：慢病毒載體介導(dǎo)的IL-10誘導(dǎo)小鼠骨髓來(lái)源耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞的形成　出處：《南昌大學(xué)》2012年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：探索體外培養(yǎng)小鼠骨髓來(lái)源未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞（immature dendriticcells, imDCs）的實(shí)驗(yàn)條件和方法。探討重組IL-10慢病毒載體轉(zhuǎn)染小鼠imDCs，構(gòu)建高分泌IL-10的耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞（tolerogenic dendritic cells, Tol-DCs）的可行性。 方法：無(wú)菌條件下體外分離獲得小鼠骨髓來(lái)源單核細(xì)胞，通過(guò)低劑量重組小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（rmGM-CSF）和重組白細(xì)胞介素4（rmIL-4）聯(lián)合誘導(dǎo)并經(jīng)CD11c免疫磁珠分選的方法獲得小鼠imDCs，取部分細(xì)胞加入腫瘤壞死因子-α（TNF-α）刺激誘導(dǎo)為成熟樹(shù)突狀細(xì)胞（mature dendritic cells,mDCs）。倒置顯微鏡下觀察DC形態(tài)變化，流式細(xì)胞術(shù)分析比較imDCs和mDCs的表型差異。IL-10重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染小鼠imDCs，同時(shí)設(shè)計(jì)GFP慢病毒轉(zhuǎn)染DC陽(yáng)性對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染DC陰性對(duì)照組，熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白（GFP）的表達(dá)，通過(guò)ELISA法檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染細(xì)胞的IL-10表達(dá)情況。將IL-10重組慢病毒轉(zhuǎn)染imDCs和未轉(zhuǎn)染imDCs分別行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，觀察T淋巴細(xì)胞增殖情況，然后分別取反應(yīng)細(xì)胞與刺激細(xì)胞比例為1:10的細(xì)胞混合液，同時(shí)設(shè)計(jì)未加imDCs的單一T細(xì)胞陰性對(duì)照組，行流式細(xì)胞術(shù)分析三組調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例的變化。 結(jié)果：利用低劑量rmGM-CSF和rmIL-4聯(lián)合誘導(dǎo)小鼠骨髓來(lái)源前體細(xì)胞并經(jīng)CD11c免疫磁珠分選的方法，獲得了大量高純度的imDCs，細(xì)胞隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)表現(xiàn)出典型的樹(shù)突狀形態(tài)，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示imDCs與mDCs比較，細(xì)胞表面MHCⅡ、CD80、CD86因子表達(dá)水平均顯著低于后者。IL-10慢病毒轉(zhuǎn)染imDCs后，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞GFP高度表達(dá)，ELISA結(jié)果顯示IL-10轉(zhuǎn)染DC組的IL-10表達(dá)水平明顯高于GFP轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染空白對(duì)照組（P0.001），GFP轉(zhuǎn)染組與空白對(duì)照組均低水平分泌IL-10，，之間無(wú)明顯差異（P=0.997,0.05）�；旌狭馨图�(xì)胞反應(yīng)及流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果分別提示imDCs經(jīng)IL-10重組慢病毒轉(zhuǎn)染后其刺激T細(xì)胞增殖能力減弱（P0.01），而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例得到提高（P0.01）。 結(jié)論：采用低劑量GM-CSF和IL-4細(xì)胞因子聯(lián)合誘導(dǎo)小鼠骨髓單核細(xì)胞的方法，獲得了低表達(dá)共刺激因子的未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞。將IL-10重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染小鼠未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞，所轉(zhuǎn)導(dǎo)的IL-10基因在未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞內(nèi)高效、穩(wěn)定地表達(dá)�；蛐揎椇蟮奈闯墒鞓�(shù)突狀細(xì)胞具有促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞增殖和抑制T淋巴細(xì)胞增殖的致免疫耐受特征。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 邱勇;李冬妹;何秀娟;張罕;李靜;梁勝男;胡永秀;;雷帕霉素和地塞米松對(duì)小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞分化成熟的調(diào)控[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2006年05期

2 苑航;劉建華;王成;李和全;王華英;鄭云;夏大靜;;IL-18基因修飾的成熟樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥的預(yù)防作用[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年02期

本文編號(hào)：1350014