本文關(guān)鍵詞：人臍帶與胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及免疫調(diào)節(jié)作用的比較　出處：《暨南大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是一類具有自我更新(self-renewal)和多向分化潛能(multi-lineage differentiation)的成體干細(xì)胞,最早在骨髓中發(fā)現(xiàn),后經(jīng)研究證實(shí),在脂肪、骨膜、滑膜、肌肉、牙髓中都發(fā)現(xiàn)了這種特殊的細(xì)胞群。由于其特殊的生物學(xué)特性,間充質(zhì)干細(xì)胞現(xiàn)已經(jīng)逐漸成為組織工程和再生醫(yī)學(xué)的主要種子細(xì)胞。目前,骨髓仍然是間充質(zhì)干細(xì)胞的主要來源。但其獲取途徑為一傾入性的過程,并且,骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞其質(zhì)量和數(shù)量都隨著供者年齡的增長而逐漸降低。以上的因素,限制了間充質(zhì)干細(xì)胞在組織工程和臨床中的運(yùn)用。目前,較多的研究都證明,人類臍帶及胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞來源廣泛,且較骨髓來源的細(xì)胞更易體外擴(kuò)增,并具有更低的免疫原性,因而已經(jīng)逐漸成為一種較好的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的替代細(xì)胞。但是迄今為止,對于胎盤及臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞其生物學(xué)特性,尚無較為深入的研究。 目的： 分離、鑒定、培養(yǎng)人類臍帶、羊膜、絨毛膜來源的間充質(zhì)干細(xì)胞,比較三種來源細(xì)胞的生物學(xué)特性,并且初步檢測其免疫調(diào)節(jié)方面的作用。 方法： 在本實(shí)驗(yàn)中,我們使用膠原酶消化法,分離出臍帶、羊膜及絨毛膜組織,并且使用貼壁培養(yǎng)純化進(jìn)行原代和傳代培養(yǎng)三種細(xì)胞。通過短串聯(lián)重復(fù)序列分析檢測絨毛膜來源細(xì)胞是否來源于胎兒絨毛膜,用MTT法檢測三種細(xì)胞生長方式,流式細(xì)胞儀分析三種細(xì)胞表型及干細(xì)胞標(biāo)記,使用不同的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基檢測其多向分化的能力。最后將三種細(xì)胞與植物血凝素刺激的外周血單個核細(xì)胞共培養(yǎng),通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測上清γ-干擾素的水平觀察比較人臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)。 結(jié)果： 短串聯(lián)重復(fù)序列分析證明絨毛膜來源間充質(zhì)干細(xì)胞為胎兒來源。三種細(xì)胞的生長均呈典型的成纖維細(xì)胞形態(tài),貼壁生長,絨毛膜間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)較臍帶和羊膜來源間充質(zhì)干細(xì)胞稍大。細(xì)胞的倍增時間由快到慢依次為：UC-MSCs、AM-MSCs、CM-MSCs。三種細(xì)胞均表達(dá)常見的間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記CD90、CD73、CD 105、CD44,不表達(dá)CD31,CD34和CD45。同時,三種細(xì)胞均表達(dá)多潛能性轉(zhuǎn)錄因子SSEA-4、Nestin和Sox-2。在不同的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)狀態(tài)下,三種細(xì)胞可向成骨、成脂方向分化。這些結(jié)果證明所得到的細(xì)胞為間充質(zhì)干細(xì)胞。當(dāng)與人類外周血單個核細(xì)胞共培養(yǎng)的時候,三種來源間充質(zhì)干細(xì)胞均能顯著抑制植物血凝素刺激的人外周血單個核細(xì)胞分泌γ-干擾素,抑制效果由強(qiáng)到弱依次為：UC-MSCs、CM-MSCs、AM-MSCs。 結(jié)論： 我們成功從人類臍帶、胎盤羊膜、絨毛膜分離培養(yǎng)和純化出間充質(zhì)干細(xì)胞,三種細(xì)胞的生物學(xué)特性以及免疫調(diào)節(jié)作用上均存在一定差異。
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【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1348478