發(fā)布時間：2017-12-27 17:38

  本文關鍵詞：直接共培養(yǎng)誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞的分化　出處：《中國組織工程研究》2017年01期 　論文類型：期刊論文

  更多相關文章： 干細胞 臍帶 間質(zhì)干細胞 軟骨細胞 組織工程 臍帶臍血干細胞 共培養(yǎng) 人臍帶間充質(zhì)干細胞 人關節(jié)軟骨細胞 軟骨細胞分化 國家自然科學基金

【摘要】：背景:軟骨細胞和間充質(zhì)干細胞都可用于構建組織工程化軟骨,但體外培養(yǎng)的軟骨細胞容易發(fā)生去分化,表型難以維持,以致其臨床應用受到限制。目的:探討人臍帶間充質(zhì)干細胞與人關節(jié)軟骨細胞直接共培養(yǎng)對人臍帶間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導分化的影響,以及直接共培養(yǎng)的最佳比例。方法:分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細胞并通過流式細胞儀鑒定表面標志。實驗分為6組:直接共培養(yǎng)組按照人臍帶間充質(zhì)干細胞與人關節(jié)軟骨細胞比例為1∶1,3∶1及5∶1(人臍帶間充質(zhì)干細胞∶人關節(jié)軟骨細胞)進行共培養(yǎng);陽性對照組用轉(zhuǎn)化生長因子β1細胞因子誘導;人關節(jié)軟骨細胞空白對照組和人臍帶間充質(zhì)干細胞空白對照組。免疫熒光細胞化學檢測Ⅱ型膠原(COL2A1)的表達水平;Western blot檢測細胞SOX9Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原蛋白表達水平;實時熒光定量qRT-PCR檢測SOX9、Col1a1、Col2a1 m RNA表達。結(jié)果與結(jié)論:(1)成功分離并鑒定人臍帶間充質(zhì)干細胞;(2)人臍帶間充質(zhì)干細胞與軟骨細胞共培養(yǎng)28 d后,共培養(yǎng)組及單獨藥物誘導的陽性對照組Ⅱ型膠原免疫熒光檢測均呈陽性;(3)陽性對照組的Col2a1 mRNA表達水平高于共培養(yǎng)組,但Ⅱ型膠原蛋白表達總量低于共培養(yǎng)組,1∶1共培養(yǎng)組的Col2a1 mRNA表達水平高于3∶1和5∶1共培養(yǎng)組。陽性對照組和共培養(yǎng)組的Col1a1 m RNA表達水平和Ⅰ型膠原蛋白表達水平均低于人關節(jié)軟骨細胞空白對照組。(4)結(jié)果說明,人臍帶間充質(zhì)干細胞和人關節(jié)軟骨細胞直接共培養(yǎng)可明顯促進人臍帶間充質(zhì)干細胞向軟骨樣細胞誘導分化,并有效抑制細胞纖維化,從縮減軟骨細胞用量方面看,直接共培養(yǎng)體系的適宜比例為5∶1。采用直接共培養(yǎng)誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞分化的成本較低,是一種較為經(jīng)濟合理的誘導方法。
[Abstract]:Background: chondrocytes and mesenchymal stem cells can be used to construct tissue-engineered cartilage, but chondrocytes in vitro are easy to dedifferentiate, and phenotypes are difficult to maintain, so that their clinical applications are limited. Objective: To investigate the effect of direct co culture of human umbilical cord mesenchymal stem cells and human articular chondrocytes on chondrogenic differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells and the optimal proportion of direct co culture. Methods: human umbilical cord mesenchymal stem cells were isolated and cultured, and the surface markers were identified by flow cytometry. The experiment was divided into 6 groups: direct co culture group according to human umbilical cord mesenchymal stem cells and human articular cartilage cell proportion is 1: 1,3: 1 and 5: 1 (human umbilical cord mesenchymal stem cells: human articular cartilage cells) were co cultured with the positive control group; transforming growth factor beta 1 induced by cytokines; human articular chondrocytes in blank control group and human umbilical cord mesenchymal stem cells in blank control group. The expression level of type II collagen (COL2A1) was detected by immunofluorescence cytochemistry. The expression level of SOX9 type I collagen and type II collagen was detected by Western blot, and SOX9, Col1a1 and Col2a1 m RNA expression was detected by real-time fluorescence quantitative qRT-PCR. Results and conclusion: (1) the successful isolation and identification of human umbilical cord mesenchymal stem cells; (2) human umbilical cord mesenchymal stem cells and chondrocytes were cultured for 28 d, the positive control group of type II collagen immunofluorescence detection group and single drug induced positive co culture; (3) the expression level of the positive control group was higher than that of Col2a1 mRNA co culture group, but the expression of type II collagen amount less than 1: 1 co culture group, co culture group Col2a1 mRNA expression level is higher than 3: 1 and 5: 1 co culture group. The expression level of Col1a1 m RNA and the expression level of type I collagen in the positive control group and the co culture group were lower than that in the blank control group. (4) the results show that human umbilical cord mesenchymal stem cells and chondrocytes were cultured directly can promote human umbilical cord mesenchymal stem cells differentiate into chondrocytes, and effectively inhibit fibrosis, reduce the amount of cartilage cells from the aspect, suitable proportion of direct co culture system was 5: 1. The cost of inducing human umbilical cord mesenchymal stem cells to differentiate into chondrocytes by direct co culture is low, which is a more economical and reasonable induction method.
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學;深圳市組織工程重點實驗室深圳市第二人民醫(yī)院;北京大學深圳研究生院;
【基金】：國家自然科學基金項目(81572198,81260161,81000460) 廣東省自然科學基金項目(2015A030313772) 深圳市科技創(chuàng)新委技術攻關項目(JSGG2014051905550503);深圳市科技創(chuàng)新委國際科技合作項目(GJHZ20130412159306739) 深圳市重點實驗室提升項目(CXB201104220049A) 深圳市科技計劃基礎研究項目(JCYJ20140414470821200,JCYJ20140414170821160) 中國博士后科學基金面上項目(2013 M530385)~~
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 文章快速閱讀:直接共培養(yǎng)對人臍帶間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導分化的影響實驗分組:檢測指標:(1)人關節(jié)軟骨細胞空白對照;(1)免疫熒光細胞化學檢測Ⅱ型膠原(2)人臍帶間充質(zhì)干細胞空白對照;(COL2A1)的表達水平;(3)人臍帶間充質(zhì)干細胞陽性對照;(2)Western blot檢測細胞SOX9Ⅰ型膠(4)

【參考文獻】

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