本文關(guān)鍵詞：多基因修飾iPS細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《南通大學(xué)》2012年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的觀測(cè)胰島素轉(zhuǎn)錄關(guān)鍵調(diào)控因子PDX-1、NeuroD及MafA對(duì)小鼠iPS細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞的作用,探討細(xì)胞移植治療1型糖尿病的新方法。 方法 (1)、小鼠Oct4、Sox2、K1f4及cMyc經(jīng)Tet-On慢病毒系統(tǒng)轉(zhuǎn)導(dǎo)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEFs),挑選并擴(kuò)展克隆,通過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定,干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1檢測(cè),體內(nèi)外三胚層分化等實(shí)驗(yàn)篩選鑒定iPS細(xì)胞。(2)、重組腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD-IRES-GFP、 Ad-mMafA-IRES-GFP聯(lián)合轉(zhuǎn)染小鼠iPS細(xì)胞,RT-PCR進(jìn)行胰島β細(xì)胞功能基因表達(dá)的檢測(cè)；免疫熒光檢測(cè)胰島素蛋白的表達(dá)及定位;ELISA檢測(cè)不同糖濃度下胰島素的分泌量。 (3)、三基因轉(zhuǎn)染的小鼠iPS細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞后移植到糖尿病小鼠肝臟,免疫組化檢測(cè)其在體內(nèi)胰島素的表達(dá),空腹血糖監(jiān)測(cè)移植細(xì)胞在糖尿病小鼠體內(nèi)的功能發(fā)揮并初步探明其移植療效。 結(jié)果 (1)、LV-ef1a-Hygromicin-TRE-Oct4/Sox2/K1f4/cMyc轉(zhuǎn)染MEFs重編程的iPS細(xì)胞能形成邊緣光整的致密克隆,表達(dá)干性基因Nanog、Rex-1、 SSEA-1并能在體內(nèi)外分化為三胚層組織。 (2)、Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP轉(zhuǎn)染的小鼠iPS細(xì)胞能分化為胰島素分泌細(xì)胞,RT-PCR結(jié)果顯示其胰島β細(xì)胞功能基因的表達(dá)與小鼠胰島β細(xì)胞株MIN6相似：免疫熒光檢測(cè)見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)有胰島素合成；ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示細(xì)胞對(duì)不同濃度葡萄糖有較好的反應(yīng)性。 (3)、免疫組化鏡檢顯示移植細(xì)胞注射區(qū)域的肝實(shí)質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)相對(duì)集中的棕黃色染色,表明移植細(xì)胞有胰島素分泌�？崭寡潜O(jiān)測(cè)顯示移植細(xì)胞能夠控制糖尿病小鼠的血糖水平,在體內(nèi)發(fā)揮良好的治療作用。 結(jié)論 (1)、LV-ef1a-Hygromicin-TRE-Oct4/Sox2/Klf4/cMyc能成功將MEFs重編程為iPS細(xì)胞。 (2)、胰腺轉(zhuǎn)錄因子PDX-1、NeuroD和MafA三者能協(xié)同作用,促進(jìn)小鼠iPS細(xì)胞分化為具有顯著的胰島素合成和分泌能力的胰島類(lèi)β細(xì)胞。 (3)、經(jīng)轉(zhuǎn)錄因子修飾的小鼠iPS細(xì)胞移植體內(nèi)能發(fā)揮一定的治療作用,并有希望成為替代細(xì)胞用于治療1型糖尿病。
[Abstract]:Objective To observe the effect of insulin transcription key regulators PDX-1, NeuroD and MafA on the differentiation of mouse iPS cells into insulin secreting cells, and explore a new method of cell transplantation for type 1 diabetes.
【學(xué)位授予單位】：南通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 孫曉娟;楊乃龍;;基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細(xì)胞[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2009年19期

2 張文成;李艷華;裴雪濤;;iPS細(xì)胞的生成——轉(zhuǎn)錄因子的決定性作用[J];中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù);2009年03期

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本文編號(hào)：1342365