本文關(guān)鍵詞：凍存復(fù)蘇制備同體來(lái)源的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞

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【摘要】：目的觀察凍存復(fù)蘇對(duì)淋巴細(xì)胞增殖及殺傷活性的影響,并探索小鼠同體CTL的制備。方法 5.0×106個(gè)/m L脾源性單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)CELLBANKER2小鼠淋巴細(xì)胞凍存液緩慢凍存,6 d后再采用39℃水浴快速?gòu)?fù)蘇;分別取新鮮淋巴細(xì)胞和凍存復(fù)蘇后(CP)淋巴細(xì)胞經(jīng)體外100 ng/m L CD3ε單克隆抗體(m Ab)、10 ng/m L重組小鼠白細(xì)胞介素2(rm IL-2)刺激擴(kuò)增7 d分別獲取細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)和CP-CIK;骨髓來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)分別于同系異體來(lái)源和凍存復(fù)蘇后自體來(lái)源的脾源性單個(gè)核細(xì)胞混合培養(yǎng)制備細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)。臺(tái)盼藍(lán)拒染法分別計(jì)數(shù)活細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD3+T及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)比例,ELISA檢測(cè)上清中γ干擾素(IFN-γ)含量、乳酸脫氫酶(LDH)釋放法分析細(xì)胞毒活性。結(jié)果淋巴細(xì)胞經(jīng)凍存復(fù)蘇后,細(xì)胞存活率為78%,凍存前、復(fù)蘇后CD3+T淋巴細(xì)胞及Treg比例無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;CP-CIK與新鮮CIK在細(xì)胞擴(kuò)增、Treg比例、上清中IFN-γ水平以及細(xì)胞毒活性均無(wú)明顯差異;同體CTL和異體CTL在細(xì)胞擴(kuò)增、Treg比例、上清中IFN-γ水平以及細(xì)胞毒活性方面也無(wú)顯著差異。結(jié)論淋巴細(xì)胞的凍存復(fù)蘇有助于獲取與傳統(tǒng)CTL同等增殖活性及殺傷活性的同體來(lái)源的CTL。
【作者單位】： 武漢大學(xué)中南醫(yī)院武漢大學(xué)肝膽疾病研究院武漢大學(xué)移植中心移植醫(yī)學(xué)技術(shù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;解放軍總醫(yī)院普通外科研究所;
【基金】：中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金(2042015kf101) 武漢市科技局基金(2016060101010033)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 過(guò)繼細(xì)胞免疫療法(adoptive cell transfer therapy,ACT)是將體外激活的自體或異體免疫效應(yīng)細(xì)胞輸注給患者,包括樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells,DC)疫苗[1]、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokines inducedkiller,CIK)[2]、γδT細(xì)胞[3]、嵌合抗原受體T細(xì)胞(chimeric antigen recepto，

本文編號(hào)：1177092