本文關(guān)鍵詞：醫(yī)學(xué)免疫學(xué)論文，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
新型免疫分子Tim
分享到：
本站編輯：admin 日期： 2010-07-31 22:35 點(diǎn)擊：次
【中文摘要】:
相關(guān)醫(yī)學(xué)免疫學(xué)論文
含塞姆利基森林病毒復(fù)制子的HIV多表位
自身免疫抗體噬菌體庫的構(gòu)建及初步鑒定
Toll樣受體3通過內(nèi)外源性途徑誘導(dǎo)細(xì)胞
抗黃曲霉毒素B_1單克隆抗體的制備及鑒
CD40信號(hào)在樹突狀細(xì)胞遷徙活化和其誘導(dǎo)
腦不對(duì)稱影響神經(jīng)免疫內(nèi)分泌的分子和細(xì)
DNA初免、重組病毒載體疫苗免疫加強(qiáng)顯
苦蕎過敏蛋白C端結(jié)構(gòu)域的原核表達(dá)及其
腦不對(duì)稱BALB/c小鼠腦組織中IL
單克隆抗體DGK
鉤端螺旋體外膜脂蛋白Loa22的克隆、表
高遷移率族蛋白B1對(duì)人T淋巴細(xì)胞免疫功
經(jīng)RNA干擾技術(shù)修飾的樹突狀細(xì)胞免疫功
重組幽門螺桿菌中性粒細(xì)胞激活蛋白融合
隨機(jī)人群體液免疫、生化指標(biāo)隨增齡變化
日本血吸蟲表膜結(jié)構(gòu)蛋白Annexin基因克
【中文摘要】目的:T細(xì)胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白(T cell immunoglobulin domain andmuein domain protein,Tim)家族是與疾病相關(guān)的一個(gè)新基因家族。Tim-4是Tim家族成員之一,小鼠Tim-4僅選擇性表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞----巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞表面。本研究的主要目的是探討Tim-4對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞生物學(xué)活性的影響,為調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞功能活性的研究提供新的思路,為新型免疫分子Tim-4的相關(guān)研究提供新的理論學(xué)說,為干預(yù)巨噬細(xì)胞參與的相關(guān)疾病提供新的靶點(diǎn)。方法:1.Tim-4在小鼠巨噬細(xì)胞中的表達(dá)及阻斷Tim-4對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7生物學(xué)活性的影響將小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7接種于24孔培養(yǎng)板,24 h后加入LPS刺激,終濃度分別為10 ng/mL、50 ng/mL及100 ng/mL,同時(shí)設(shè)PBS對(duì)照組。48h后收集細(xì)胞,RT-PCR檢測(cè)Tim-4 mRNA表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Tim-4蛋白表達(dá)。將小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7接種96孔培養(yǎng)板,24 h后其中兩組分別加入羊IgG(終濃度為5μg/mL)、羊抗小鼠Tim-4抗體(終濃度為5μg/mL),37℃孵育1 h,再分別加入LPS(終濃度為1 00 ng/mL)。另外兩組分別加入PBS和LPS(終濃度為100 ng/mL),48 h后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清,Griess法檢測(cè)NO的分泌,RT-PCR檢測(cè)誘生型一氧化氮合酶(indueible Nitric OXide Synthase,iNOS)mRNA的表達(dá)。2.穩(wěn)定高表達(dá)Tim-4巨噬細(xì)胞系的建立及鑒定設(shè)計(jì)Tim-4特異性引物,包含HindⅢ和BamHⅠ酶切位點(diǎn),以小鼠腹腔巨噬細(xì)胞cDNA為模板,RT-PCR擴(kuò)增小鼠Tim-4全基因片段,凝膠電泳,觀察分析結(jié)果。PCR產(chǎn)物經(jīng)HindⅢ和BamHⅠ雙酶切,回收克隆入pcDNA3.0載體,進(jìn)行連接、轉(zhuǎn)化,LA平板篩選陽性克隆pcDNA3.0-Tim-4。PCR、酶切及DNA測(cè)序分析鑒定其正確性。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒將重組子轉(zhuǎn)染小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7,經(jīng)G418篩選,建立穩(wěn)定高表達(dá)Tim-4的小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7-T4,經(jīng)RT-PCR、流式細(xì)胞術(shù)和免疫細(xì)胞化學(xué)染色的方法檢測(cè)Tim-4 mRNA和蛋白的表達(dá)水平。3.Tim-4基因過表達(dá)對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7生物學(xué)活性的影響利用建立的穩(wěn)定高表達(dá)小鼠Tim-4的巨噬細(xì)胞系RAW264.7-T4,以穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pcDNA3.0的細(xì)胞系RAW264.7-P為對(duì)照組,接種于96孔培養(yǎng)板,各組設(shè)LPS刺激組(終濃度為100 ng/mL)與PBS對(duì)照組,LPS刺激24 h后收集培養(yǎng)上清,Griess法檢測(cè)NO的分泌,抽提各組細(xì)胞總RNA,RT-PCR分析各組細(xì)胞iNOS及TNF-αmRNA的表達(dá)。收集RAW264.7-P、RAW264.7-T4兩組細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面分子MHC-Ⅱ類分子、CD80、CD86的表達(dá)及對(duì)FITC-右旋糖酐(FITC-dextran)的吞噬能力。結(jié)果1.Tim-4在小鼠巨噬細(xì)胞中的表達(dá)及阻斷Tim-4對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7生物學(xué)活性的影響利用RT-PCR的方法檢測(cè)Tim-4 mRNA的表達(dá),結(jié)果顯示巨噬細(xì)胞RAW264.7僅表達(dá)較低水平的Tim-4,而100 ng/mL LPS刺激后Tim-4的表達(dá)明顯升高。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)經(jīng)LPS刺激后,Tim-4蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)上升趨勢(shì),并呈劑量依賴性。分別收集PBS對(duì)照組、LPS刺激組、羊IgG加LPS刺激組及Tim-4抗體加LPS刺激組的細(xì)胞培養(yǎng)上清,檢測(cè)NO的分泌,結(jié)果顯示Tim-4抗體加LPS刺激組NO的分泌顯著高于IgG對(duì)照組(50.4±4.49μmol/L;35.44±5.12μmol/L,P＜0.05),抽提各組細(xì)胞總RNA,RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,Tim-4抗體加LPS刺激組iNOSmRNA表達(dá)水平亦顯著高于對(duì)照組(1.56±0.05;1.17±0.07,P＜0.05)。2.穩(wěn)定高表達(dá)Tim-4巨噬細(xì)胞系的建立及鑒定將成功構(gòu)建的pcDNA3.0-Tim-4真核表達(dá)載體及對(duì)照載體pcDNA3.0分別轉(zhuǎn)染入RAW264.7細(xì)胞,經(jīng)G418篩選,RT-PCR和流式細(xì)胞術(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)染色分析發(fā)現(xiàn)RAW264.7-T4細(xì)胞其Tim-4在mRNA和蛋白質(zhì)水平上都有較高表達(dá),表明成功建立了穩(wěn)定高表達(dá)小鼠Tim-4的巨噬細(xì)胞系(將建立的細(xì)胞系分別命名為RAW264.7-74 RAW264.7-P)。3.Tim-4過表達(dá)對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7生物學(xué)活性的影響利用建立的穩(wěn)定高表達(dá)小鼠Tim-4的巨噬細(xì)胞模型,以pcDNA3.0轉(zhuǎn)染RAW264.7并篩選成功的細(xì)胞(RAW264.7-P)為對(duì)照組,發(fā)現(xiàn)RAW264.7-T4細(xì)胞LPS(終濃度100 ng/mL)刺激與未刺激時(shí)其NO分泌及iNOS、TNF-αmRNA表達(dá)均顯著低于RAW264.7-P組(P＜0.05)。高表達(dá)小鼠Tim-4的巨噬細(xì)胞組其表面分子CD80的表達(dá)百分率低于空載體組(26.12±0.84:80.5±1.96),CD86分子的表達(dá)百分率亦低于空載體組(3.63±1.75:1.4±1.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而兩組細(xì)胞MHC-Ⅱ類分子的表達(dá)及對(duì)FITC-dextran的吞噬能力均無顯著性差異(P＞0.05)。結(jié)論:小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7表達(dá)內(nèi)源性Tim-4,經(jīng)絲裂原LPS刺激后,Tim-4mRNA及蛋白水平上調(diào),并呈劑量依賴性:Tim-4通過影響NO分泌、iNOS、TNF-αmRNA的表達(dá)及共刺激分子CD80、CD86的表達(dá)負(fù)性調(diào)節(jié)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7的生物學(xué)活性。
【簡(jiǎn)要目錄】:快速索取本篇簡(jiǎn)要目錄>>> 【我要投稿】
【全文提供】:快速索取本篇論文全文>>> 【論文輔導(dǎo)】
本文出自：
本文TAGS：
上一篇：肺炎鏈球菌CbpA基因疫苗的構(gòu)建及與蛋白質(zhì)疫苗聯(lián)合免疫效果的實(shí)驗(yàn) 下一篇：β3整合素作為漢坦病毒受體的鑒定以及其它候選受體的篩選
本文關(guān)鍵詞：醫(yī)學(xué)免疫學(xué)論文，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
，
本文編號(hào)：227275
本文鏈接：http://sikaile.net/wenshubaike/kjzx/227275.html
