在海洋天然產(chǎn)物中,馬鮫魚是一種重要的高活性抗氧化肽生物源,具有極高的加工附加值。由于魚體組織的復(fù)雜性,活性抗氧化肽成分的提取和篩選對(duì)樣品制備和分離技術(shù)提出了挑戰(zhàn)。使用不同蛋白酶對(duì)魚體組織進(jìn)行酶解時(shí),所獲得的活性肽結(jié)構(gòu)及功能活性會(huì)有顯著的差別。為了獲得高活性的抗氧化肽,該研究分別考察了風(fēng)味蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶5種蛋白酶的酶解效果。以二苯代苦味肼基自由基（DPPH·）、羥自由基（·OH）清除率和水解度（DH）為指標(biāo),篩選最優(yōu)水解酶。結(jié)果表明,胰蛋白酶酶解液清除DPPH·和·OH能力最強(qiáng),清除率分別達(dá)到88.93%±0.82%和53.09%±0.73%。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以DPPH·清除率為響應(yīng)值,以加酶量、酶解溫度和時(shí)間為函數(shù),進(jìn)行了三因素三水平響應(yīng)面試驗(yàn),獲得水解度23.66%、DPPH·清除率93.78%以及·OH清除率62.59%的最優(yōu)制備條件。納流液相色譜具有低樣品量、低溶劑消耗和高效等優(yōu)勢(shì)。為篩選出適合于馬鮫魚內(nèi)臟抗氧化肽分離分析的固定相,該研究使用1∶1 000分流比的納流液相平臺(tái),分別使用反相C18柱（15 cm×100μm, 5μm, 3... 

【文章來(lái)源】：色譜. 2020,38(12)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

加酶量和酶解溫度對(duì)DPPH·清除率交互影響的響應(yīng)面和等高線

加酶量和酶解時(shí)間對(duì)DPPH·清除率交互影響的響應(yīng)面和等高線

圖4顯示了當(dāng)加酶量位于中心點(diǎn)即0.4%時(shí),酶解時(shí)間和酶解溫度對(duì)DPPH·清除率的交互影響效應(yīng)。由圖4可以看出,在同一酶解溫度下,DPPH·清除率隨著酶解時(shí)間的增加而先增加后趨于平穩(wěn);在同一酶解時(shí)間下,DPPH·清除率隨著酶解溫度的升高而先升高后降低。說(shuō)明在一定的酶解溫度范圍內(nèi),要達(dá)到較高的DPPH·清除率,適當(dāng)?shù)厣呙附鉁囟瓤梢钥s短酶解所需的時(shí)間。根據(jù)Design Expert v8.0.6對(duì)模型進(jìn)行優(yōu)化,得出結(jié)果:加酶量0.368%、酶解溫度40.55 ℃、酶解時(shí)間2.545 h。在此條件下,模型預(yù)測(cè)APS對(duì)DPPH·的清除率達(dá)到94.415%�？紤]到實(shí)際試驗(yàn)時(shí)操作的可行性,調(diào)整工藝條件為:加酶量0.37%,酶解溫度41 ℃,酶解時(shí)間2.5 h。重復(fù)3次試驗(yàn),得到DPPH·清除率為93.78%±0.35%,與預(yù)測(cè)值相比,相對(duì)誤差為0.67%,說(shuō)明擬合模型優(yōu)化出的條件較為準(zhǔn)確。在此條件下,APS的水解度為23.66%, ·OH清除率為62.59%。

【參考文獻(xiàn)】：
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