本研究旨在建立一種單核細(xì)胞增生李斯特氏菌熒光RPA檢測(cè)方法。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌actA基因序列的比對(duì)分析,選擇同源性好的片段以此設(shè)計(jì)引物及探針,建立檢測(cè)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的RPA方法。結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)所建立的方法特異性較強(qiáng),只對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌為檢出陽性,對(duì)其他菌種無擴(kuò)增,該方法的檢出限為2.3×102cfu/mL。在對(duì)實(shí)驗(yàn)室分離菌株的檢測(cè)分析中,其檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)培養(yǎng)方法一致。在人工污染樣品的檢測(cè)中,經(jīng)過4 h的培養(yǎng)后,該方法可檢出DNA濃度為2.3×102cfu/mL的單核細(xì)胞增生李斯特氏菌。本研究所建立的RPA檢測(cè)方法能夠快速準(zhǔn)確地檢測(cè)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌,為基層檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室和疫情突發(fā)現(xiàn)場(chǎng)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的快速檢測(cè)提供了有效的技術(shù)手段。 

【文章來源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2020,39(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌熒光RPA檢測(cè)方法的建立

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌熒光RPA方法和RT-PCR方法的特異性實(shí)驗(yàn)

將人工污染單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的豬肉樣品放于30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)0、2 h、4 h、6 h后，每個(gè)稀釋度取1 m L模擬污染液，提取核酸，利用熒光RPA方法檢測(cè)。結(jié)果顯示模擬污染的豬肉樣品在培養(yǎng)4 h后，熒光RPA方法的檢出限為2.3×102cfu/m L (圖4)。從而表明該方法在實(shí)際樣品檢測(cè)中具有較高的靈敏度，具有極強(qiáng)的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。2 討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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