發(fā)布時間：2021-10-08 15:10

　　本研究旨在建立一種單核細(xì)胞增生李斯特氏菌熒光RPA檢測方法。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌actA基因序列的比對分析,選擇同源性好的片段以此設(shè)計引物及探針,建立檢測單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的RPA方法。結(jié)果表明,本實驗所建立的方法特異性較強,只對單核細(xì)胞增生李斯特氏菌為檢出陽性,對其他菌種無擴增,該方法的檢出限為2.3×102cfu/mL。在對實驗室分離菌株的檢測分析中,其檢測結(jié)果與傳統(tǒng)培養(yǎng)方法一致。在人工污染樣品的檢測中,經(jīng)過4 h的培養(yǎng)后,該方法可檢出DNA濃度為2.3×102cfu/mL的單核細(xì)胞增生李斯特氏菌。本研究所建立的RPA檢測方法能夠快速準(zhǔn)確地檢測單核細(xì)胞增生李斯特氏菌,為基層檢測實驗室和疫情突發(fā)現(xiàn)場單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的快速檢測提供了有效的技術(shù)手段。 

【文章來源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2020,39(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌熒光RPA檢測方法的建立

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌熒光RPA方法和RT-PCR方法的特異性實驗

將人工污染單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的豬肉樣品放于30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)0、2 h、4 h、6 h后，每個稀釋度取1 m L模擬污染液，提取核酸，利用熒光RPA方法檢測。結(jié)果顯示模擬污染的豬肉樣品在培養(yǎng)4 h后，熒光RPA方法的檢出限為2.3×102cfu/m L (圖4)。從而表明該方法在實際樣品檢測中具有較高的靈敏度，具有極強的實際應(yīng)用價值。2 討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重組酶聚合酶擴增技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 郭正洋,劉鐘棟,劉小青,陳晶,蘭全學(xué).  食品科技. 2018(09)
[2]轉(zhuǎn)基因水稻PA110-15基于RPA等溫擴增及DNA試紙條聯(lián)檢的品系特異性檢測方法[J]. 賈玄,李凱,董美,金蕪軍,李亮,苗朝華,劉衛(wèi)曉,宛煜嵩.  分子植物育種. 2017(12)
[3]冷凍飲品加工過程中單核細(xì)胞增生李斯特菌污染狀況分析[J]. 王嵐,賈華云,陳帥,劉曉革,劉建琪,張林青,張紅,湛志飛.  實用預(yù)防醫(yī)學(xué). 2017(11)
[4]3種食源性致病菌Tem-PCR檢測方法的建立[J]. 劉忠梅,徐義剛,曲敏,莫春生,劉新亮,李蘇龍.  食品科學(xué). 2016(04)
[5]應(yīng)用Taqman實時PCR法檢測豬肉中單核細(xì)胞增生李斯特菌[J]. 閆琳,王曉英,郭云昌,裴曉燕,余東敏,楊大進(jìn).  衛(wèi)生研究. 2014(02)



本文編號：3424413