發(fā)布時(shí)間：2017-08-20 12:21

  本文關(guān)鍵詞：RIP3硝化在大鼠心腦缺血再灌注損傷中的作用及紅花黃色素的干預(yù)研究

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【摘要】：研究背景缺血性心臟疾病和腦卒中通過介入或者藥物溶栓等方法實(shí)現(xiàn)血運(yùn)重建是心腦的重要措施,也極大地改善了患者的預(yù)后,但是由此導(dǎo)致的缺血再灌注損傷(Ischemia Reperfusion Injury, IRI),在一定程度上削弱了介入或者藥物溶栓在臨床上的應(yīng)用效果。IRI現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)迫使人們開始心腦保護(hù)的相關(guān)基礎(chǔ)和臨床研究。缺血再灌注損傷涉及到諸多環(huán)節(jié),包能量代謝障礙、鈣超載、氧自由基損傷和細(xì)胞凋亡等。如何抑制細(xì)胞凋亡進(jìn)而減輕或避免IRI,尋求減輕IRI的靶點(diǎn),探索其分子機(jī)制,找到新的心腦保護(hù)藥物和策略,成為研究的熱點(diǎn)問題。一氧化氮(Nitric oxide, NO)參與了眾多疾病的生理和病理生理過程,是一種易擴(kuò)散的生物活性小分子,在調(diào)控氧化還原信號(hào)和細(xì)胞功能中具有重要作用。激活依賴環(huán)鳥苷酸(cyclic guanosine monophosphate, cGMP)信號(hào)通路是NO的經(jīng)典途徑,進(jìn)而調(diào)節(jié)機(jī)體的生理作用；NO還可以通過與蛋白質(zhì)親核巰基發(fā)生翻譯后修飾進(jìn)一步生成亞硝基硫醇(S-nitrosothiols, RSNO)達(dá)到修飾調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的目的,因此研究蛋白質(zhì)巰基亞硝基化及其相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制將為臨床提供新的減輕IRI的干預(yù)手段和方法。在缺血缺氧等氧化應(yīng)激條件下,體內(nèi)會(huì)過量生成NO與O2-,短時(shí)間內(nèi)瀑布樣反應(yīng)生成大量過氧亞硝基陰離子ONOO",作用于細(xì)胞內(nèi)靶蛋白質(zhì)酪氨酸等殘基,使其發(fā)生硝化,起到調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能的作用。硝化過多的現(xiàn)象見于多種疾病的病理損傷過程,如心血管疾病、部分炎癥、缺血性腦血管疾病和退行性神經(jīng)病變等。蛋白質(zhì)硝化是指由NO自由基與02-迅速反應(yīng),在短時(shí)間內(nèi)生成大量ONOO-,對(duì)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)中的酪氨酸殘基進(jìn)行硝化生成3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT),從而改變其結(jié)構(gòu)和功能。RIP3(Receptor interacting protein3,RIP3)作為細(xì)胞應(yīng)激傳感分子,在調(diào)控細(xì)胞凋亡、細(xì)胞壞死通路中發(fā)揮重要作用,那么RIP3的硝化在IRI的是如何變化的呢?該硝化在整個(gè)調(diào)控過程中扮演何種角色,以及作用的靶點(diǎn)在什么地方都是需要進(jìn)行研究的。減輕缺血再灌注損傷的手段和藥物較多,其中傳統(tǒng)中醫(yī)藥具有很大優(yōu)勢(shì),而紅花黃色素(safflor yellow, SY)具有清除自由基、改善心腦細(xì)胞能量代謝、減輕鈣超載、抑制細(xì)胞凋亡等多種作用,可減輕IRI。但其作用的分子機(jī)制是否在抑制硝化中發(fā)揮重要作用呢?我們通過動(dòng)物在體和器官離體實(shí)驗(yàn),應(yīng)用生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)和形態(tài)學(xué)手段進(jìn)行了相關(guān)檢測(cè)和系列研究。第一部分：RIP3硝化對(duì)在體大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響及紅花黃色素干預(yù)研究研究背景缺血再灌注損傷(ischemia and reperfusion injury, IRI)是指組織因缺血發(fā)生可逆性、可存活的損傷,缺血區(qū)域再次獲得血運(yùn)重建后原來功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷卻進(jìn)一步加重的現(xiàn)象。缺血性心臟病在恢復(fù)再灌注后,部分可發(fā)生再灌注心律失常、心肌舒縮功能障礙、代謝異常及心肌超微結(jié)構(gòu)的改變,其中氧自由基(oxygen free radicals,OFR)的過量產(chǎn)生是導(dǎo)致心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemia reperfusion injury, MIRI)的重要因素之一。在缺血缺氧后體內(nèi)會(huì)過量生成NO與O2-,短時(shí)間內(nèi)迅速反應(yīng)生成大量過氧亞硝基陰離子(ONOO-),作用于細(xì)胞內(nèi)靶蛋白質(zhì)酪氨酸等殘基,使其發(fā)生硝化,調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的功能。硝化過多則參與介導(dǎo)各種缺血性心腦損傷、炎癥和退行性神經(jīng)病變等多種疾病的病理過程。受體相互作用蛋白3(Receptor interacting protein 3, RIP3)作為最早被鑒定出來的蛋白激酶之一,屬于RIPs家族的一員,其過量表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。多種缺血壞死性疾病有RIP3的參與,但RIP3及其共價(jià)修飾(硝化)在MIRI中的研究較少,尤其是應(yīng)用分子生物學(xué)的技術(shù)和手段以及通過在體心肌缺血再灌注(Ischemia-reperfusion, I/R)模型研究,尚無相關(guān)的報(bào)道。紅花黃色素(safflor yellow,SY)可以抑制自由基產(chǎn)生或清除自由基、改善心肌組織能量代謝、減輕細(xì)胞內(nèi)鈣超載和抑制細(xì)胞凋亡等多種作用,從而減輕MIRI。但SY保護(hù)MIRI的內(nèi)在機(jī)制,尤其是分子信號(hào)通路研究報(bào)道極少,‘是目前亟待解決的問題。在此基礎(chǔ)上,我們提出：1.RIP3硝化在MIRI中是否發(fā)揮重要重要作用?2.中藥紅花黃色素的,心肌保護(hù)作用是否與RIP3硝化及RIP1磷酸化(活化)等具有相關(guān)性。研究目的1.觀察SY后處理在體缺血再灌注大鼠心肌的血流動(dòng)力學(xué)、組織病理學(xué)的變化情況。2.給予不同劑量SY進(jìn)行干預(yù)后處理,檢測(cè)RIP3硝化(nitration of receptor interacting protein 3, N-RIP3)及RIP1磷酸化(phosphorylation of receptor interacting protein 1,P-RIP1),研究SY對(duì)在體大鼠MIRI保護(hù)作用的分子機(jī)制。研究方法1.清潔級(jí)健康SD大鼠108只,雄性,隨機(jī)分為6組(n=18)：假手術(shù)組(Sham組)、心肌缺血再灌注組(I/R組)、SY低劑量組(SY 10 mg/kg組)、SY中劑量組(SY 30 mg/kg組)、SY高劑量組(SY 90 mg/kg組)、依達(dá)拉奉組(Eda 10 mg/kg組)。通過在體夾閉冠狀動(dòng)脈左前降支(left anterior descending of coronary artery, LAD)的方法制備MIRI模型。Sham組只穿縫線,不結(jié)扎。I/R組及藥物干預(yù)各組在再灌注前1 min經(jīng)分別經(jīng)股靜脈注射0.9%氯化鈉注射液、不同劑量SY和Eda, SY及Eda均用等量0.9%氯化鈉注射液稀釋；Sham組在對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)注射等量0.9%氯化鈉注射液。2.在缺血即刻(To)、缺血30 min末(T1)、再灌注30 min末(T2)、再灌注60 min末(T3)、再灌注90 min末(T4)和再灌注120 min末(T5)等6個(gè)時(shí)間點(diǎn)記錄大鼠心肌功能學(xué)指標(biāo)：心率(HR)、左室發(fā)展壓(left ventricular development pressure, LVDP)、左室舒張末期壓(left ventricular end-diastolic pressure, LVEDP)、左室內(nèi)壓上升和下降速率最大值(maximum change rate of left ventricular pressure rise and fall,±dp/dtmax)。3.再灌注120 min末穿刺右心室抽取靜脈血,采用比色法測(cè)血漿中丙二醛(malonaldehyde, MDA)的含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme MB, CK-MB)的活性；4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死動(dòng)物,取心臟切片后給予2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride, TTC)染色計(jì)算心肌梗死面積(%),HE染色觀察心肌組織學(xué)改變,Western Blot法測(cè)定硝化的受體相互作用蛋白3(nitration of receptor interacting protein 3, N-RIP3)、磷酸化的受體相互作用蛋白1(phosphorylation of receptor interacting protein 1, P-RIP1)的水平。研究結(jié)果1.各組缺血前血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)HR, LVEDP、LVDP、±dp/dtmax相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；2.與sham組相比,I/R組及不同劑量藥物干預(yù)組大鼠在缺血30 min末、再灌注90 min末和120 min末的HR、LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax的絕對(duì)值降低,LVEDP升高,再灌注120 min末的血漿MDA含量升高、CK-MB活性升高,SOD活性下降,N-RIP3、 P-RIP1增高,心肌凋亡細(xì)胞比例增高；3.與I/R組相比,高劑量SY組及Eda組大鼠在再灌注90 min末及120 min末LVDP、 +dp/dtmax、-dp/dtmax的絕對(duì)值升高,LVEDP降低。再灌注120 min末的血漿MDA含量、CK-MB活性降低,SOD活性升高,N-RIP3、P-RIP 1表達(dá)降低,心肌梗死面積及心肌凋亡細(xì)胞比例降低,心肌病理改變減輕。SY低劑量組和中劑量組各項(xiàng)指標(biāo)與I/R組相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,心肌病理改變差異不明顯；4.與低劑量、中劑量組相比,高劑量組在再灌注90 min末及120 min末,LVDP、 dp/dtmax、-dp/dtmax的絕對(duì)值升高,LVEDP降低,再灌注120 min末的血漿MDA含量降低、CK-MB活性下降、SOD活性升高,N-RIP3、P-RIP1降低,心肌梗死面積及心肌凋亡細(xì)胞比例顯著降低。研究結(jié)論1.在體大鼠MIRI中,氧自由基(OFR)過量生成,RIP3硝化增多并被激活,促進(jìn)下游信號(hào)分子RIP1的磷酸化,加重MIRI2.SY具有清除OFR作用,進(jìn)而減少RIP3硝化及RIP1的磷酸化,對(duì)MIRI起到保護(hù)作用,且具有量效關(guān)系。第二部分：RIP3硝化對(duì)離體大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響及紅花黃色素干預(yù)研究研究背景蛋白質(zhì)翻譯后的共價(jià)修飾有磷酸化、糖基化、乙酰化和硝化等。在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中,對(duì)蛋白質(zhì)的磷酸化進(jìn)行了廣泛而深入的研究,而最近,蛋白質(zhì)硝化也引起了關(guān)注。蛋白質(zhì)硝化是指由NO自由基與02-迅速反應(yīng),在短時(shí)間內(nèi)生成大量ONOO-,對(duì)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)中的酪氨酸殘基硝化生成3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT)。如果機(jī)體清除能力下降,不能清除過量的3-NT,體內(nèi)多種有重要功能的蛋白功能將會(huì)受損或活性下降,不但使線粒體和DNA損傷,也會(huì)使酪氨酸磷酸化受到抑制,從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和衰老等級(jí)聯(lián)反應(yīng)過程。在某些病理?xiàng)l件下如應(yīng)激和炎癥等,在肺、肝臟和血管內(nèi)皮中可以檢測(cè)到3-NT,體內(nèi)酪氨酸硝化的產(chǎn)生與分布決定于3-NT生成與定位。ONOO-生物學(xué)特性異常活躍,是一種強(qiáng)氧化劑,而且具有硝化功能,可以與生物大分子如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)何核酸等反應(yīng)。在正常情況下,蛋白質(zhì)硝化反應(yīng)存在很多正常組織中,信號(hào)途徑的調(diào)節(jié)與體內(nèi)低水平的蛋白質(zhì)硝化反應(yīng)有關(guān)。但是,過度的硝化則參與介導(dǎo)心腦血管疾病、炎性反應(yīng)、缺血性腦損傷以及退行性神經(jīng)紊亂等多種疾病的病理損傷過程。在體研究已經(jīng)證實(shí)紅花黃色素能通過減少RIP3硝化和RIP1的磷酸化而發(fā)揮保護(hù)作用。那么,在去除了神經(jīng)內(nèi)分泌等因素情況下,紅花黃色素能否依然發(fā)揮可靠的心肌保護(hù)作用呢?如果有作用的話,是否也是抑制了RIP3的硝化來實(shí)現(xiàn)信號(hào)調(diào)控的呢?我們通過應(yīng)用離體大鼠缺血再灌注損傷模型,給予不同劑量SY,研究其心肌保護(hù)作用強(qiáng)度及內(nèi)在機(jī)制等。研究目的1.觀察不同劑量SY對(duì)離體缺血再灌注大鼠心肌的血流動(dòng)力學(xué)、心肌梗死面積、組織病理學(xué)、心肌細(xì)胞凋亡情況。2.觀察N-RIP3及P-RIP1變化,闡明SY對(duì)離體心肌MIRI保護(hù)作用的分子信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。研究方法1.清潔級(jí)SD大鼠60只隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組(A組),缺血再灌注組(B組)、低劑量SY組(10μmol/L, C組),中劑量SY組(30μmol/L, D組),高劑量SY組(90μmol/L, E組),依達(dá)拉奉組(F組)。大鼠肝素化,戊巴比妥麻醉后,取心,剪斷大血管,主動(dòng)脈保留3-4 mm,懸吊于Langendorff'恒壓逆行灌注裝置,左心耳處剪小口,置入水囊連接換能器,經(jīng)模數(shù)轉(zhuǎn)換器與計(jì)算機(jī)相連記錄數(shù)據(jù)。2.心功能學(xué)指標(biāo)監(jiān)測(cè)同第一部分,監(jiān)測(cè)缺血前即刻(T0)、缺血30 min末(T1)、再灌注30 min末(T2)、再灌注60 min末(T3)、再灌注90 min末(T4)和再灌注120 min末(T5)六個(gè)時(shí)間點(diǎn)的HR、LVDP、LVEDP和±dp/dtmax。3.測(cè)量心肌梗死面積、評(píng)估心肌細(xì)胞損傷及凋亡情況等方法學(xué)同第一部分。4.免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)聯(lián)合Western Blotting分析RIP1磷酸化、RIP3硝化水平。研究結(jié)果1.與對(duì)照組相比,IR組心功能指標(biāo)明顯減低,與IR組相比,藥物干預(yù)組左心室心功能指標(biāo)明顯改善,中劑量SY組效果較好。2.與IR組相比,空白對(duì)照組、低劑量SY組、中劑量SY組和高劑量SY組以及依達(dá)拉奉組心肌梗死面積顯著降低,而中劑量SY組梗死面積較小。各劑量藥物處理組,在再灌注120 min末,心肌勻漿組織檢測(cè)SOD活性升高,MDA含量下降。3.光鏡下,對(duì)照組心肌纖維排列規(guī)則,界限清楚、橫紋明顯規(guī)則,IR組心肌纖維排列紊亂,且心肌纖維部分?jǐn)嗔衙黠@,橫紋不明顯,各劑量SY組可見心肌纖維排列漸規(guī)則,斷裂漸少,而依達(dá)拉奉組心肌纖維排列尚整齊,但較稀疏,可見橫紋�？梢娮攸S色核的TUNEL陽性細(xì)胞,并且可見細(xì)胞空泡化,以IR組最為明顯,SY、依達(dá)拉奉組心肌細(xì)胞凋亡比例下降；4.離體大鼠心肌再灌注120min末,各藥物干預(yù)組的RIP3、RIP1表達(dá)水平均降低,中、高劑量SY及依達(dá)拉奉的RIP3硝化水平降低,低劑量SY組的RIP3表達(dá)水平及RIP3硝化水平高,而高劑量SY組和依達(dá)拉奉組的RIP3表達(dá)水平低,低、高劑量SY組和依達(dá)拉奉組的RIPl表達(dá)量低。IR時(shí),RIP3硝化水平上升,SY或依達(dá)拉奉干預(yù)后,可降低RIP3的硝化水平。RIP1表達(dá)水平上升,且不同SY濃度對(duì)RIPl表達(dá)水平影響不同。研究結(jié)論1.大鼠離體心臟缺血再灌注損傷時(shí),RIP3的硝化水平升高,并促進(jìn)下游RIP1磷酸化水平升高,二者誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,加重心肌損傷；2.SY通過降低RIP3硝化、RIP1磷酸化,減輕自由基損傷,降低心肌細(xì)胞凋亡比例,對(duì)缺血再灌注損傷心肌發(fā)揮保護(hù)作用,且其作用呈劑量依賴性。第三部分：PYK2的巰基亞硝基化在缺血再灌注損傷的相關(guān)性及活化位點(diǎn)研究研究背景富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2(PYK2,也稱作細(xì)胞粘附激酶-β, RAFTK,或CADTK)是粘著斑激酶家族非受體酪氨酸激酶成員,PYK2參與G蛋白偶聯(lián)受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),煙堿型乙酰膽堿受體,細(xì)胞膜去極化和應(yīng)力。PYK2由FERM,激酶結(jié)構(gòu)域,富含脯氨酸的區(qū)域,和粘著定位(脂肪)域組成。位于FERM和激酶結(jié)構(gòu)域之間第402位酪氨酸的自身磷酸化促使PYK2的活化。有研究顯示,PYK2酪氨酸的磷酸化在細(xì)胞中的分布已經(jīng)由其酪氨酸磷酸化抗體檢測(cè)到。它的主要自身磷酸化位點(diǎn)是402位的酪氨酸。缺血可以導(dǎo)致PYK2的活化,缺血短時(shí)期誘導(dǎo)的鈣離子大量?jī)?nèi)流,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣超載。內(nèi)源性的NO是通過一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸合成的,它與蛋白分子的半胱氨酸巰基亞硝基化(S-亞硝基化)相互聯(lián)系。S-亞硝基化,NO類化合物可以對(duì)同型半胱氨酸側(cè)鏈進(jìn)行共價(jià)修飾,是一種重要的翻譯后修飾,對(duì)蛋白質(zhì)功能具有重要的的調(diào)控作用。細(xì)胞內(nèi)Ca2+的靶向蛋白有磷酸酶,蛋白激酶,和NOS。nNOS主要應(yīng)答鈣-鈣調(diào)蛋白信號(hào)通路。有意義的是,一些研究表明,PYK2是一種被雌激素誘導(dǎo)的ROS激活,對(duì)氧化還原敏感的激酶。但PYK2的激活機(jī)制還沒有完全闡明。根據(jù)以上所述,我們推測(cè),在細(xì)胞經(jīng)過OGD后,通過NMDAR介導(dǎo)的Ca2+內(nèi)流導(dǎo)致了鈣-鈣調(diào)素信號(hào)化合物的形成。這種化合物使得內(nèi)源性的NO合成增加,導(dǎo)致PYK2蛋白S-亞硝基化,而激活PYK2,最終導(dǎo)致了細(xì)胞死亡。在本研究中,我們首先檢測(cè),一氧化氮供體GSNO使培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)的PYK2巰基亞硝基化,其次,在大鼠缺血復(fù)灌不同的時(shí)間點(diǎn)可以誘導(dǎo)PYK2的巰基亞硝基化和活化。研究目的1.檢測(cè)外源性一氧化氮使PYK2巰基亞硝基化。2.檢測(cè)缺血再灌注誘導(dǎo)的內(nèi)源性NO導(dǎo)致PYK2巰基亞硝基化和活化。3.檢測(cè)介導(dǎo)PYK2巰基亞硝基化的位點(diǎn)。研究方法1.利用PYK2-SPORT6質(zhì)粒為模板構(gòu)建PYK2突變體質(zhì)粒。PYK2酶活性區(qū)域的每個(gè)半胱氨酸(C)殘基突變?yōu)楦拾彼?G)。2.應(yīng)用生物素轉(zhuǎn)化法測(cè)定PYK2的巰基亞硝基化情況。3.免疫印跡對(duì)P-PYK2(活化的PYK2)進(jìn)行檢測(cè)。4.DAPI染色檢測(cè)凋亡樣細(xì)胞死亡。研究結(jié)果1.在培養(yǎng)的HEK-293細(xì)胞中,用GSNO處理,過表達(dá)的PYK2能形成一個(gè)顯著的亞硝基化蛋白,且與GSNO呈濃度和時(shí)間依賴性,NEM可以與蛋白質(zhì)的自由巰基反應(yīng)使之烷基化從而封閉巰基。給予NEM后,用GSNO處理的細(xì)胞,PYK2的巰基亞硝基化被完全抑制。當(dāng)加入nNOS抑制劑7NI時(shí),再給予鈣載體A23187, PYK2的巰基亞硝基化也被抑制。2.通過對(duì)膜上PYK2巰基亞硝基化條帶密度的測(cè)定,與野生型相比,C534G突變體下降約86%。3. OGD 6 h和12h后野生型PYK2的亞硝基化使得其功能活性有著顯著的提升,C534G突變體與野生型相比,PYK2的亞硝基化和磷酸化水平明顯下降,在過表達(dá)C534G突變體PYK2的SH-SY5Y細(xì)胞中,細(xì)胞凋亡明顯減少。研究結(jié)論1.PYK2能被外源性NO (GSNO)或nNOS產(chǎn)生的內(nèi)源性NO亞硝基化。2.PYK2的534位半胱氨酸為其承擔(dān)巰基亞硝基化的位點(diǎn)。3.PYK2的巰基亞硝基化參與了其活化。
【關(guān)鍵詞】：紅花黃色素 心肌缺血再灌注 RIP3 RIP1 硝化 紅花黃色素 心肌缺血再灌注 RIP3 硝化 富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2 缺糖缺氧 亞硝基化
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要7-17
• 英文摘要17-27
• 符號(hào)說明27-29
• 前言29-39
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 第一部分 RIP3硝化在在體大鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用及紅花黃色素的干預(yù)研究39-75
• 研究背景39-40
• 1.材料與方法40-55
• 2.結(jié)果55-57
• 3.討論57-63
• 4.結(jié)論63-64
• 附圖表64-71
• 參考文獻(xiàn)71-75
• 第二部分 RIP3硝化在離體大鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用及紅花黃色素的干預(yù)研究75-98
• 研究背景75-76
• 1.材料與方法76-79
• 2.結(jié)果79-81
• 3.討論81-86
• 4.結(jié)論86-87
• 附圖表87-94
• 參考文獻(xiàn)94-98
• 第三部分 PYK2巰基亞硝基化在缺血再灌注損傷中的相關(guān)性及位點(diǎn)鑒定98-114
• 研究背景98-99
• 1.材料與方法99-102
• 2.結(jié)果102-104
• 3.討論104-105
• 4.結(jié)論105-106
• 附圖表106-111
• 參考文獻(xiàn)111-114
• 致謝114-115
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄115-116
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表116-117
• 英文文章1117-135
• 英文文章2135-147

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳偉;金鳴;樸永哲;李金榮;;紅花黃色素緩解大鼠心肌缺血的作用[J];中草藥;2007年09期

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本文編號(hào)：706597