第一部分體外預(yù)誘導(dǎo)軟骨塊的培養(yǎng)和鑒定研究目的:分離和鑒定小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并且在體外制備預(yù)誘導(dǎo)軟骨塊。材料與方法:利用全骨髓貼壁法分離原代C57BL/6小鼠的骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),培養(yǎng)至第三代,通過流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)鑒定其干細(xì)胞特征性表面標(biāo)志的表達(dá)情況,利用對應(yīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基對細(xì)胞進(jìn)行成骨、成脂向分化,并通過茜素紅和油紅O染色進(jìn)行鑒定;隨后將第三代BMSCs接種至商用明膠海綿(Spongostan○R)(10⁶細(xì)胞/個(gè)),經(jīng)過一周的增殖培養(yǎng)基和四周的軟骨塊誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)后,利用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測肥大軟骨細(xì)胞特征性標(biāo)志,并通過Safranin O染色觀察軟骨塊切片。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示本研究分離的小鼠BMSCs特征性高表達(dá)CD44、CD29和Sca-1,同時(shí)基本不表達(dá)造血系細(xì)胞標(biāo)志CD31和CD34;成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后茜素紅染色可見深紅...

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
論文創(chuàng)新點(diǎn)
中文摘要
Abstract
引言
文獻(xiàn)綜述
第一部分 體外預(yù)誘導(dǎo)軟骨塊的培養(yǎng)和鑒定
    實(shí)驗(yàn)一 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)和鑒定
    實(shí)驗(yàn)二 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為軟骨塊
第二部分 清除受體小鼠的單核/巨噬細(xì)胞對軟骨塊皮下成骨成血管的影響..
    實(shí)驗(yàn)一 清除小鼠血液循環(huán)中的單核/巨噬細(xì)胞
    實(shí)驗(yàn)二 清除單核/巨噬細(xì)胞影響軟骨塊皮下成骨效應(yīng)
第三部分 軟骨塊植入正常小鼠后趨化的巨噬細(xì)胞的M2/M1 表型變化
    1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4 討論
第四部分 軟骨塊與巨噬細(xì)胞相互作用的體外研究
    實(shí)驗(yàn)一 軟骨塊對巨噬細(xì)胞極化的影響及機(jī)制
    實(shí)驗(yàn)二 極化后的巨噬細(xì)胞對軟骨塊成骨成血管指標(biāo)的影響
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻博期間的科研成果
個(gè)人簡歷
附頁
致謝



本文編號：4005165