研究背景和意義甲狀腺癌是世界上常見的惡性腫瘤之一,過去的幾十年中,甲狀腺癌的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)都呈現(xiàn)明顯上升的趨勢(shì)。在我國,2015年甲狀腺癌的發(fā)病率達(dá)到女性惡性腫瘤發(fā)病率的第四位,占女性惡性腫瘤的8.49%。臨床工作中常見的甲狀腺癌病理類型有四種:乳頭狀癌、髓樣癌、濾泡狀癌以及未分化癌。其中乳頭狀癌是最為常見的病理類型,約占全部甲狀腺癌的88%。有研究認(rèn)為甲狀腺乳頭狀癌發(fā)病率的上升導(dǎo)致了甲狀腺癌發(fā)病率的整體上升。手術(shù)治療為甲狀腺乳頭狀癌的主要治療手段之一,手術(shù)治療效果良好。據(jù)報(bào)道,甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后20年生存率可達(dá)99%。盡管甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后生存率很高,但長(zhǎng)期隨訪結(jié)果顯示,其復(fù)發(fā)率高達(dá)25%。甲狀腺乳頭狀癌不但給患者帶來了手術(shù)治療的身體的創(chuàng)傷,同時(shí)也因?qū)膊?fù)發(fā)恐懼,帶來了沉重的心理負(fù)擔(dān)。因此,進(jìn)行相關(guān)的基礎(chǔ)研究,闡明甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制具有重要的價(jià)值。MicroRNA(miRNA)是一類非編碼單鏈小RNA分子,一般是由內(nèi)源基因編碼的,長(zhǎng)度約為19-25個(gè)核苷酸。MiRNA可以通過識(shí)別靶基因轉(zhuǎn)錄后的目的mRNA的3'端非編碼區(qū)域(3'untranslated regi...

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略語說明
前言
第一部分 MiR-299-3P在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)
    材料和方法
        一、材料與試劑
            1、組織標(biāo)本來源
            2、細(xì)胞系來源
            3、主要試劑
        二、主要實(shí)驗(yàn)儀器
        三、實(shí)驗(yàn)方法
            1、細(xì)胞培養(yǎng)
            2、甲狀腺乳頭狀癌組織及癌旁組織總RNA提取
            3、細(xì)胞總RNA的提取
            4、逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
            5、實(shí)時(shí)熒光定量PCR的實(shí)施
        四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    結(jié)果
        1、組織總RNA及細(xì)胞總RNA的抽提結(jié)果
        2、MiR-299-3P在甲狀腺乳頭狀癌中低表達(dá)
        3、MiR-299-3P在不同甲狀腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)
    討論
第二部分 MiR-299-3P對(duì)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞功能的影響
    材料和方法
        一、材料與試劑
            1、細(xì)胞系
            2、主要試劑
        二、主要實(shí)驗(yàn)儀器
        三、實(shí)驗(yàn)方法
            1、MiR-299-3P mimics、inhibitor及其陰性對(duì)照的轉(zhuǎn)染
            2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            3、CCK-8法繪制細(xì)胞增殖曲線
            4、Edu增殖檢測(cè)
            5、細(xì)胞周期的檢測(cè)
            6、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡(Annexin V/PI雙染色法)
        四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    結(jié)果
        1、甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞miR-299-3P表達(dá)的上調(diào)和抑制
        2、MiR-299-3p表達(dá)對(duì)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞增殖的影響
        3、MiR-299-3p表達(dá)對(duì)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞周期分布的影響
        4、MiR-299-3p表達(dá)對(duì)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞凋亡的影響
    討論
第三部分 MiR-299-3p在動(dòng)物體內(nèi)的作用研究
    材料和方法
        一、材料
        二、實(shí)驗(yàn)方法
        三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    結(jié)果
        1、移植瘤miR-299-3p表達(dá)的檢測(cè)
        2、MiR-299-3p的過表達(dá)抑制了移植瘤的生長(zhǎng)
    討論
第四部分 MiR-299-3p靶基因的預(yù)測(cè)及驗(yàn)證
    材料及方法
        一、材料與試劑
        二、主要儀器
        三、實(shí)驗(yàn)方法
            1、MiR-299-3p候選靶基因的篩選和驗(yàn)證
            2、甲狀腺癌手術(shù)標(biāo)本SHOC2 mRNA水平的檢測(cè)
            3、SHOC2過表達(dá)pcDNA 3.1質(zhì)粒的構(gòu)建
            4、Western blot實(shí)驗(yàn)
            5、其它
    結(jié)果
        1、MiR-299-3p靶基因的篩選
        2、利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)證實(shí)SHOC2是miR-299-3p直接作用的靶基因
        3、在甲狀腺乳頭狀癌中SHOC2表達(dá)與miR-299-3p表達(dá)的關(guān)系
        4、Rescue assay
    討論
結(jié)論
意義
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：4037879