研究背景和意義甲狀腺癌是世界上常見的惡性腫瘤之一,過去的幾十年中,甲狀腺癌的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)都呈現(xiàn)明顯上升的趨勢。在我國,2015年甲狀腺癌的發(fā)病率達到女性惡性腫瘤發(fā)病率的第四位,占女性惡性腫瘤的8.49%。臨床工作中常見的甲狀腺癌病理類型有四種:乳頭狀癌、髓樣癌、濾泡狀癌以及未分化癌。其中乳頭狀癌是最為常見的病理類型,約占全部甲狀腺癌的88%。有研究認為甲狀腺乳頭狀癌發(fā)病率的上升導致了甲狀腺癌發(fā)病率的整體上升。手術治療為甲狀腺乳頭狀癌的主要治療手段之一,手術治療效果良好。據(jù)報道,甲狀腺乳頭狀癌術后20年生存率可達99%。盡管甲狀腺乳頭狀癌術后生存率很高,但長期隨訪結果顯示,其復發(fā)率高達25%。甲狀腺乳頭狀癌不但給患者帶來了手術治療的身體的創(chuàng)傷,同時也因?qū)膊桶l(fā)恐懼,帶來了沉重的心理負擔。因此,進行相關的基礎研究,闡明甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生、發(fā)展的分子機制具有重要的價值。MicroRNA(miRNA)是一類非編碼單鏈小RNA分子,一般是由內(nèi)源基因編碼的,長度約為19-25個核苷酸。MiRNA可以通過識別靶基因轉(zhuǎn)錄后的目的mRNA的3'端非編碼區(qū)域(3'untranslated regi...

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學位級別】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
縮略語說明
前言
第一部分 MiR-299-3P在甲狀腺乳頭狀癌中的表達
    材料和方法
        一、材料與試劑
            1、組織標本來源
            2、細胞系來源
            3、主要試劑
        二、主要實驗儀器
        三、實驗方法
            1、細胞培養(yǎng)
            2、甲狀腺乳頭狀癌組織及癌旁組織總RNA提取
            3、細胞總RNA的提取
            4、逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
            5、實時熒光定量PCR的實施
        四、統(tǒng)計學方法
    結果
        1、組織總RNA及細胞總RNA的抽提結果
        2、MiR-299-3P在甲狀腺乳頭狀癌中低表達
        3、MiR-299-3P在不同甲狀腺癌細胞系中的表達
    討論
第二部分 MiR-299-3P對甲狀腺乳頭狀癌細胞功能的影響
    材料和方法
        一、材料與試劑
            1、細胞系
            2、主要試劑
        二、主要實驗儀器
        三、實驗方法
            1、MiR-299-3P mimics、inhibitor及其陰性對照的轉(zhuǎn)染
            2、實時熒光定量PCR
            3、CCK-8法繪制細胞增殖曲線
            4、Edu增殖檢測
            5、細胞周期的檢測
            6、流式細胞儀檢測細胞凋亡(Annexin V/PI雙染色法)
        四、統(tǒng)計學方法
    結果
        1、甲狀腺乳頭狀癌細胞miR-299-3P表達的上調(diào)和抑制
        2、MiR-299-3p表達對甲狀腺乳頭狀癌細胞增殖的影響
        3、MiR-299-3p表達對甲狀腺乳頭狀癌細胞周期分布的影響
        4、MiR-299-3p表達對甲狀腺乳頭狀癌細胞凋亡的影響
    討論
第三部分 MiR-299-3p在動物體內(nèi)的作用研究
    材料和方法
        一、材料
        二、實驗方法
        三、統(tǒng)計學方法
    結果
        1、移植瘤miR-299-3p表達的檢測
        2、MiR-299-3p的過表達抑制了移植瘤的生長
    討論
第四部分 MiR-299-3p靶基因的預測及驗證
    材料及方法
        一、材料與試劑
        二、主要儀器
        三、實驗方法
            1、MiR-299-3p候選靶基因的篩選和驗證
            2、甲狀腺癌手術標本SHOC2 mRNA水平的檢測
            3、SHOC2過表達pcDNA 3.1質(zhì)粒的構建
            4、Western blot實驗
            5、其它
    結果
        1、MiR-299-3p靶基因的篩選
        2、利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)證實SHOC2是miR-299-3p直接作用的靶基因
        3、在甲狀腺乳頭狀癌中SHOC2表達與miR-299-3p表達的關系
        4、Rescue assay
    討論
結論
意義
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
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本文編號：4037879