發(fā)布時(shí)間：2025-03-15 03:38

　　目的:潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是炎癥性腸病的一種,病情長(zhǎng)且易反復(fù)發(fā)作,嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量。UC病人常伴有失眠和晝夜節(jié)律紊亂癥狀,這表明UC與生物鐘關(guān)聯(lián)密切。然而,UC是否受到生物鐘的調(diào)控及其作用機(jī)制目前尚不明確。本論文研究旨在解析生物鐘與UC之間的關(guān)聯(lián),闡明生物鐘核心蛋白R(shí)EV-ERBα對(duì)UC的調(diào)控效應(yīng)及作用機(jī)制。具體研究目標(biāo)如下:(1)建立小鼠UC模型,測(cè)定結(jié)腸基因表達(dá)譜,考察時(shí)鐘基因表達(dá)變化;(2)建立生理型和基因型節(jié)律擾亂小鼠模型,評(píng)價(jià)節(jié)律擾亂對(duì)UC易感性的影響;(3)測(cè)定UC小鼠和節(jié)律擾亂小鼠中Rev-erbα的表達(dá),并考察Rev-erbα基因敲除對(duì)UC易感性的影響;(4)明確REV-ERBα對(duì)UC的調(diào)控途徑,闡明調(diào)控機(jī)制;(5)采用小分子激動(dòng)劑靶向激活REV-ERBα,探討REV-ERBα對(duì)UC的預(yù)防和治療作用。方法:1.以C57BL/6J小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,采用葡聚糖硫酸鈉(DSS)構(gòu)建小鼠UC模型。采用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)測(cè)定UC模型小鼠和正常小鼠結(jié)腸基因在六個(gè)晝夜時(shí)點(diǎn)的表達(dá)。篩選UC小鼠和正常小鼠結(jié)腸的節(jié)律基因。進(jìn)一步分析小鼠結(jié)腸中主要時(shí)鐘基因的變化趨勢(shì),并采用熒光定量PCR(q ...

【文章頁(yè)數(shù)】：132 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1-2.生物鐘與疾病。

時(shí)辰治療學(xué)根據(jù)生理和病理的晝夜變化規(guī)律來(lái)尋找藥物(包括中藥)療效高,毒性低的治療時(shí)間。中醫(yī)很早就形成了“擇時(shí)用藥”理論,選擇在最優(yōu)的時(shí)間段用藥對(duì)疾病的治療大有裨益。2生物鐘蛋白R(shí)EV-ERB

圖6-1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案圖。(A)野生型小鼠肝臟REV-ERBα的節(jié)律表達(dá)。(B)UC造模前給藥SR9009的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案。(C)UC造模后給藥SR9009的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案。

REV-ERBα蛋白在一天中于ZT8表達(dá)量最高(圖6-1A),因此SR9009給藥的時(shí)間點(diǎn)設(shè)置為ZT8。對(duì)于SR9009對(duì)小鼠UC預(yù)防作用實(shí)驗(yàn),先使用SR9009(50mg/kg)于ZT8每天經(jīng)腹腔給藥一次(圖6-1B)。SR9009連續(xù)給七天后,各組小鼠同時(shí)給予2.5%DSS....

圖6-2.REV-ERBα激活緩解小鼠UC病情。(A)給予DSS的四組小鼠的體重丟失情況檢測(cè)。(B)給予DSS的四組小鼠的DAI評(píng)分。(C)SR9009處理和對(duì)照小鼠的生存率(log-rank檢驗(yàn))。(D)給予DSS的四組小鼠的結(jié)腸長(zhǎng)度。在解剖時(shí)測(cè)量結(jié)腸長(zhǎng)度。(E)結(jié)腸H&E染色代表圖。比例尺=100μm。(F)給予DSS的四組小鼠的組織學(xué)病理評(píng)分。(G)小鼠于第8 天的結(jié)腸MPO活性。(H)qPCR檢測(cè)UC小鼠于第8 天的全結(jié)腸組織中Nlrp3、IL-1β和IL-18的表達(dá)。(I)ELISA法檢測(cè)經(jīng)DSS喂養(yǎng)的小鼠于第8 天結(jié)腸IL-18蛋白水平。(J)免疫印跡法檢測(cè)UC小鼠于第8 天PMs或結(jié)腸中NLRP3、IL-1β和β-Actin的表達(dá)。SR,SR9009。

我們首先評(píng)價(jià)了REV-ERBα激動(dòng)劑SR9009對(duì)野生型小鼠UC的預(yù)防作用。野生型小鼠于DSS造模前連續(xù)給予SR9009(或溶劑對(duì)照)七天。與溶劑對(duì)照處理組的小鼠相比,SR9009處理組的小鼠體重?fù)p失更少、DAI評(píng)分更低、生存率更高,結(jié)腸長(zhǎng)度更長(zhǎng)(圖6-2A-D)。SR9009給....

圖6-3.SR9009對(duì)Rev-erbα敲除的UC小鼠無(wú)預(yù)防作用。(A)給予DSS,使用SR9009或溶劑對(duì)照處理的Rev-erbα-/-小鼠的體重丟失情況測(cè)量。(B)給予DSS,使用SR9009或溶劑對(duì)照處理的Rev-erbα-/-小鼠的DAI評(píng)分。(C)給予DSS,使用SR9009或溶劑對(duì)照處理的Rev-erbα-/-小鼠的的生存率(log-rank檢驗(yàn))。(D)給予DSS并經(jīng)SR9009或溶劑對(duì)照處理的Rev-erbα-/-小鼠的結(jié)腸長(zhǎng)度。解剖后測(cè)量結(jié)腸長(zhǎng)度。(E)結(jié)腸H&E染色代表圖。比例尺=100μm。(F)給予DSS,使用SR9009或溶劑對(duì)照處理的Rev-erbα-/-小鼠的組織學(xué)病理評(píng)分。(G)小鼠于第8 天的結(jié)腸MPO活性。(H)qPCR檢測(cè)UC小鼠于第8 天的全結(jié)腸組織中Nlrp3、IL-1β和IL-18的表達(dá)。(I)ELISA法檢測(cè)給予DSS的小鼠于第8天結(jié)腸IL-18蛋白水平。(J)免疫印跡法檢測(cè)UC小鼠于第8 天結(jié)腸中NLRP3、IL-1β和β-Actin的表達(dá)。SR,SR9009。

我們進(jìn)一步評(píng)價(jià)了SR9009對(duì)Rev-erbα敲除小鼠UC發(fā)病的影響。Rev-erbα-/-小鼠于DSS造模前連續(xù)7天給予SR9009(或溶劑對(duì)照)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,SR9009處理組和溶劑對(duì)照組在小鼠體重、DAI評(píng)分、生存率、結(jié)腸長(zhǎng)度、組織病理學(xué)評(píng)分和MPO活性等指標(biāo)方面無(wú)明顯差....

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