USP47與SMURF2介導的SATB1泛素化調(diào)控結腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機制研究
【文章頁數(shù)】:115 頁
【學位級別】:博士
【部分圖文】:
圖2.1 DUB文庫免疫共沉淀顯示USP47與SATB1存在相互作用。將DUB文庫相關質(zhì)粒分別與SATB1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,用對應的抗體進行免疫共沉淀后,再免疫印跡檢測DUB文庫質(zhì)粒與SATB1質(zhì)粒相互作用情況。
從大約60個DUB中,通過免疫共沉淀分析蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)互作,結果顯示(圖2.1):在DUB文庫中,SATB1蛋白與去泛素化酶USP47存在相互作用。圖2.1DUB文庫免疫共沉淀顯示USP47與SATB1存在相互作用。將DUB文庫相關質(zhì)粒分別與SATB1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,用....
圖2.1 DUB文庫免疫共沉淀顯示USP47與SATB1存在相互作用。將DUB文庫相關質(zhì)粒分別與SATB1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,用對應的抗體進行免疫共沉淀后,再免疫印跡檢測DUB文庫質(zhì)粒與SATB1質(zhì)粒相互作用情況。
圖2.1DUB文庫免疫共沉淀顯示USP47與SATB1存在相互作用。將DUB文庫相關質(zhì)粒分別與SATB1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,用對應的抗體進行免疫共沉淀后,再免疫印跡檢測DUB文庫質(zhì)粒與SATB1質(zhì)粒相互作用情況。2.4.2USP47與SATB1存在相互作用
圖2.2 USP47和SATB1特異性相互作用:(A)在293T細胞中外轉(zhuǎn)質(zhì)粒,驗證USP47與SATB1的外源性相互作用。Flag-SATB1表達質(zhì)粒單獨或與myc-USP47共轉(zhuǎn)染到HEK293T細胞中,用抗myc抗體免疫沉淀SATB1蛋白;Flag-USP47表達質(zhì)粒單獨或與myc-SATB1共轉(zhuǎn)染到HEK293T細胞中,用抗myc抗體免疫沉淀USP47蛋白。并在全細胞裂解液中驗證SATB1和USP47的表達。(B)在HCT116細胞中,驗證USP47與SATB1的內(nèi)源性相互作用。正常兔IgG(r IgG)用作對照。
為進一步確定SATB1與USP47之間的相互關系,我們首先在293T細胞中轉(zhuǎn)染質(zhì)粒,通過免疫共沉淀方法分析USP47與SATB1蛋白互作情況,結果顯示:通過USP47可以共沉淀SATB1,同樣通過SATB1也可以共沉淀USP47(圖2.2A)。此外,在結腸癌細胞HCT116中,用....
圖2.3 USP47及其突變體示意圖:USP47含有一個氮末端C19C功能結構域,中間卷曲結構域和一個羧基端。
去泛素化酶USP47包含有氨基端C19C功能結構域,中間卷曲結構域和羧基端結構域。為了分析USP47結構域中與SATB1相互作用的區(qū)段,我們設計構建了USP47的截短突變體(圖2.3)。免疫共沉淀結果顯示:SATB1與全長USP47、氨基端含C19C結構域的截短突變體相互作用,而....
本文編號:4021221
本文鏈接:http://sikaile.net/shoufeilunwen/yxlbs/4021221.html