結直腸癌是全世界范圍內(nèi)常見的消化道腫瘤,在惡性腫瘤中排第三位,是癌癥死亡的一大主要原因。隨著人們飲食生活水平的提高,結直腸癌的發(fā)病率和死亡率逐年增加。特別是在我國腫瘤患者中,男性和女性的結直腸癌發(fā)病率分別居于第四位和第五位。近年來,盡管手術切除、放療和化療在調(diào)節(jié)各種局部腫瘤方面取得了進展,但結直腸癌的復發(fā)和腫瘤轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)仍是治療失敗的主要原因。因此,闡明結直腸癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的潛在分子機制就顯得至關重要。特異性AT富集序列結合蛋白1基因位于染色體3p23上,全長763個氨基酸。SATB1的表達具有組織特異性。研究證明SATB1在結腸癌和乳腺癌等癌癥中高表達并發(fā)揮重要作用。SATB1在乳腺癌中能同時改變上千個基因的表達,上調(diào)促癌基因,下調(diào)抑癌基因,促進癌細胞的生長和轉(zhuǎn)移。SATB1參與基因表達的負調(diào)控,SATB1與MAR結合形成網(wǎng)架結構的復合體,錨定于其環(huán)基底部,參與染色體重塑和組蛋白去泛素化酶的“著陸”,進而調(diào)控基因表達。SATB1參與T細胞發(fā)育,協(xié)調(diào)T細胞發(fā)育各個階段的基因正常有序的表達,SATB1通過組蛋白去泛素化酶等改變某些結構域的結構,影響轉(zhuǎn)錄因子進入染色體,影響T細胞發(fā)育相關基因的...

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖2.1 DUB文庫免疫共沉淀顯示USP47與SATB1存在相互作用。將DUB文庫相關質(zhì)粒分別與SATB1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,用對應的抗體進行免疫共沉淀后,再免疫印跡檢測DUB文庫質(zhì)粒與SATB1質(zhì)粒相互作用情況。

從大約60個DUB中,通過免疫共沉淀分析蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)互作,結果顯示(圖2.1):在DUB文庫中,SATB1蛋白與去泛素化酶USP47存在相互作用。圖2.1DUB文庫免疫共沉淀顯示USP47與SATB1存在相互作用。將DUB文庫相關質(zhì)粒分別與SATB1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,用....

圖2.1 DUB文庫免疫共沉淀顯示USP47與SATB1存在相互作用。將DUB文庫相關質(zhì)粒分別與SATB1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,用對應的抗體進行免疫共沉淀后,再免疫印跡檢測DUB文庫質(zhì)粒與SATB1質(zhì)粒相互作用情況。

圖2.1DUB文庫免疫共沉淀顯示USP47與SATB1存在相互作用。將DUB文庫相關質(zhì)粒分別與SATB1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,用對應的抗體進行免疫共沉淀后,再免疫印跡檢測DUB文庫質(zhì)粒與SATB1質(zhì)粒相互作用情況。2.4.2USP47與SATB1存在相互作用

圖2.2 USP47和SATB1特異性相互作用:(A)在293T細胞中外轉(zhuǎn)質(zhì)粒,驗證USP47與SATB1的外源性相互作用。Flag-SATB1表達質(zhì)粒單獨或與myc-USP47共轉(zhuǎn)染到HEK293T細胞中,用抗myc抗體免疫沉淀SATB1蛋白;Flag-USP47表達質(zhì)粒單獨或與myc-SATB1共轉(zhuǎn)染到HEK293T細胞中,用抗myc抗體免疫沉淀USP47蛋白。并在全細胞裂解液中驗證SATB1和USP47的表達。(B)在HCT116細胞中,驗證USP47與SATB1的內(nèi)源性相互作用。正常兔IgG(r IgG)用作對照。

為進一步確定SATB1與USP47之間的相互關系,我們首先在293T細胞中轉(zhuǎn)染質(zhì)粒,通過免疫共沉淀方法分析USP47與SATB1蛋白互作情況,結果顯示:通過USP47可以共沉淀SATB1,同樣通過SATB1也可以共沉淀USP47(圖2.2A)。此外,在結腸癌細胞HCT116中,用....

圖2.3 USP47及其突變體示意圖:USP47含有一個氮末端C19C功能結構域,中間卷曲結構域和一個羧基端。

去泛素化酶USP47包含有氨基端C19C功能結構域,中間卷曲結構域和羧基端結構域。為了分析USP47結構域中與SATB1相互作用的區(qū)段,我們設計構建了USP47的截短突變體(圖2.3)。免疫共沉淀結果顯示:SATB1與全長USP47、氨基端含C19C結構域的截短突變體相互作用,而....

本文編號：4021221