第一部分UHRF1在雄性生殖細(xì)胞發(fā)育過程中的作用及機(jī)制研究[目的]逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的沉默是維持整個生殖系基因組完整性的關(guān)鍵。在哺乳動物生殖系中,DNA甲基化、抑制性組蛋白修飾以及PIWI蛋白在調(diào)控逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的沉默上發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。然而,DNA甲基化、抑制性組蛋白修飾以及PIWI蛋白是如何在雄性生殖系中共同作用來確保逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的沉默,目前尚不清楚。UHRF1在DNA甲基化和組蛋白修飾上有著重要的作用,本研究旨在明確UHRF1是否在三種逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子沉默途徑中有一定調(diào)控作用,并探究UHRF1在雄性生殖細(xì)胞的發(fā)育過程中的作用及機(jī)制。[方法]我們主要通過構(gòu)建生殖細(xì)胞條件性敲除Uhrf1小鼠模型(Stra8-cre;Uhrf1_lox/lox)來研究UHRF1在雄性生殖細(xì)胞中的功能。[結(jié)果]我們發(fā)現(xiàn)出生后生殖細(xì)胞中Uhrf1的敲除導(dǎo)致雄性小鼠完全不育,成年敲除小鼠生殖細(xì)胞凋亡,逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子被異常激活,生殖細(xì)胞出現(xiàn)DNA損傷以及基因組DNA低甲基化。同時,我們發(fā)現(xiàn)在Uhrf1敲除的睪丸組織中,組蛋白修飾出現(xiàn)由抑制性H3K9me2/3修飾向活躍性H3K4me3修飾轉(zhuǎn)變。此外,我們...

【文章頁數(shù)】：155 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
前言
摘要
ABSTRACT
第一部分 UHRF1在雄性小鼠生殖細(xì)胞發(fā)育中的作用及機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)生化試劑
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)所用引物
            2.1.4 常用試劑配方
            2.1.5 實(shí)驗(yàn)動物
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 組織形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)
            2.2.2 生化與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
            2.2.3 基因表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與細(xì)胞免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
            2.2.5 雄性小鼠生育力測試
    3 結(jié)果
        3.1 UHRF1在雄性生殖細(xì)胞中的定位表達(dá)研究
        3.2 雄性生殖細(xì)胞Uhrf1條件性敲除小鼠不育
        3.3 Uhrf1條件性敲除導(dǎo)致雄性生殖細(xì)胞中逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子異常激活
        3.4 Uhrf1 條件性敲除對雄性生殖細(xì)胞DNA甲基化水平的影響
        3.5 Uhrf1條件性敲除對雄性生殖細(xì)胞組蛋白修飾水平的影響
        3.6 Uhrf1 條件性敲除導(dǎo)致PRMT5 及其修飾的組蛋白表達(dá)降低
        3.7 Uhrf1 條件性敲除影響PIWI家族蛋白的表達(dá)水平
        3.8 Uhrf1條件性敲除導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄組水平發(fā)生變化
    4 討論
    5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
第二部分 母源性UHRF1在小鼠卵母細(xì)胞及早期胚胎發(fā)育中的功能研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 組織形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)
            2.2.2 卵母細(xì)胞及早期胚胎實(shí)驗(yàn)
            2.2.3 生化與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
            2.2.4 雌性小鼠生育力測試
    3 結(jié)果
        3.1 UHRF1在小鼠卵母細(xì)胞及早期胚胎中的表達(dá)
        3.2 Uhrf1卵母細(xì)胞條件性敲除小鼠模型的構(gòu)建
        3.3 Uhrf1 卵母細(xì)胞條件性敲除的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
        3.4 母源性Uhrf1的缺失導(dǎo)致雌性小鼠不育
        3.5 卵母細(xì)胞Uhrf1的缺失不影響雌性小鼠卵泡發(fā)育
        3.6 母源性Uhrf1的缺失導(dǎo)致小鼠早期胚胎發(fā)育停滯
        3.7 卵母細(xì)胞Uhrf1的缺失導(dǎo)致小鼠卵母細(xì)胞表觀遺傳修飾發(fā)生變化
        3.8 母源性Uhrf1的缺失導(dǎo)致小鼠早期胚胎表觀遺傳修飾發(fā)生變化
    4 討論
    5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附件1 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表論文目錄
附件2 英文縮略詞一覽表



本文編號：3943207