目的:設計靶向c-Met的嵌合抗原受體T細胞(Chimeric antigen receptor T cell,CAR-T),驗證其在胃癌中的有效性及安全性,并對c-Met CAR進行PD1/CD28融合受體優(yōu)化以改善免疫抑制,提高抗腫瘤效果。方法:使用生物信息學的方法分析TCGA中胃癌數(shù)據(jù)的c-Met表達情況及其與生存預后的關系。收集手術患者的胃癌腫瘤及癌旁組織標本,用免疫組化的方法檢測c-Met的表達。并用PCR、WB、流式細胞計數(shù)等方法檢測6種不同胃癌細胞系c-Met、PD-L1的基因和蛋白表達情況。構建c-Met CAR和cMet-PD1/CD28 CAR質粒,包裝慢病毒、感染T細胞,制備對應的CAR-T。在體外細胞實驗中,檢測CAR-T細胞不同亞群和表型的變化,及靶細胞刺激對CAR-T激活和PD-1表達的影響。檢測CAR-T的細胞因子分泌水平,并通過乳酸脫氫酶釋放實驗、7-AAD染色、CD107a脫顆粒反應等方法反映c-Met CAR-T、cMet-PD1/CD28 CAR-T對靶細胞的殺傷能力。在體內動物模型中,通過活體小動物成像等方法觀測兩種CAR-T對小鼠胃癌皮下移植腫...

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1胃癌CAR-T基礎和臨床研究的數(shù)量

蘭州大學博士學位論文c-MetCAR-T及PD1/CD28融合受體CAR-T在胃癌中的研究8圖1-1胃癌CAR-T基礎和臨床研究的數(shù)量。(a)胃癌CAR-T基礎研究各靶點的研究數(shù)量；(b)各地區(qū)胃癌CAR-T基礎研究的數(shù)量；(c)胃癌CAR-T臨床試驗各靶點的注冊數(shù)量；(d)各地....

圖2-1(a)MET基因在胃癌和正常組織中的表達差異，MET基因表達與胃癌組織(b)微衛(wèi)星穩(wěn)定性、(c)病理分期、(d)Lauren分型之間的關系

蘭州大學博士學位論文c-MetCAR-T及PD1/CD28融合受體CAR-T在胃癌中的研究0.045)，Lauren分型中腸型的MET轉錄水平高于彌漫型(p=0.019)（圖2-1）。但是MET的轉....

圖2-2MET基因表達量與胃癌患者(a)性別、(b)年齡、(c)組織學分級、(d)幽門螺桿菌感染之間的關系

蘭州大學博士學位論文c-MetCAR-T及PD1/CD28融合受體CAR-T在胃癌中的研究18圖2-2MET基因表達量與胃癌患者(a)性別、(b)年齡、(c)組織學分級、(d)幽門螺桿菌感染之間的關系。Figure2-2RelationshipbetweenMETgeneexpr....

圖2-3MET基因表達水平對胃癌患者(a)總生存期、(b)疾病相關生存期、(c)無進展生存期、(d)無病生存期的影響

蘭州大學博士學位論文c-MetCAR-T及PD1/CD28融合受體CAR-T在胃癌中的研究19圖2-3MET基因表達水平對胃癌患者(a)總生存期、(b)疾病相關生存期、(c)無進展生存期、(d)無病生存期的影響。Figure2-3TheeffectofMETgeneexpress....

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