背景和目的:胃癌是世界第4大常見的惡性腫瘤,在腫瘤導致的死亡原因中占第2位,在我國腫瘤發(fā)病率和腫瘤致死原因中亦占第2位,僅次于肺癌。目前,外科手術仍然是早期胃癌的主要治療方法。但是由于該病的高度異質性、起病隱匿、發(fā)展迅速等特點,大多數(shù)胃癌患者確診時已處于疾病的中晚期,往往需要聯(lián)合化療等其他治療手段。隨著對疾病病因、病理和分子機制等方面的認識逐步加深,胃癌化療方案的選擇以及分子靶向藥物的研發(fā)有了一定進展,但尚未取得顯著的效果。此外,療效的限制也可能與胃癌發(fā)生發(fā)展過程比較復雜,常常涉及多個基因、信號通路的改變有關。因此,進一步闡明胃癌的發(fā)病機制,探索新的分子靶向藥物并使患者的生存受益,仍是胃癌治療中亟待解決的重點問題。小泛素相關修飾物(small ubiquitin-like modifiers,SUMOs)是一種新發(fā)現(xiàn)的泛素樣分子,它能夠可逆地修飾翻譯后的蛋白,具有調節(jié)靶蛋白穩(wěn)定性、定位及與其他蛋白相互作用的功能。多項研究指出SUMO化修飾參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。然而,泛素樣修飾物活化酶2(ubiquitin-like modifier activating enzyme 2,UBA2)作為...

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 文獻綜述
    2.1 胃癌的研究現(xiàn)況
        2.1.1 胃癌概述
        2.1.2 胃癌發(fā)病的分子機制
        2.1.3 胃癌治療的研究進展
    2.2 UBA2 與腫瘤的發(fā)生發(fā)展
        2.2.1 UBA2 的功能與SUMO化循環(huán)
        2.2.2 UBA2和SUMO化修飾與腫瘤
        2.2.3 UBA2和SUMO化修飾與胃癌的發(fā)生發(fā)展
第3章 UBA2 在人胃癌組織中的表達及臨床意義
    3.1 實驗材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 組織標本來源
        3.2.2 免疫組織化學染色檢測UBA2 蛋白表達水平
        3.2.3 Western blotting法檢測蛋白表達
        3.2.4 TCGA數(shù)據(jù)庫中胃癌UBA2 m RNA水平
        3.2.5 統(tǒng)計學分析
    3.3 實驗結果
        3.3.1 人胃癌組織中UBA2 水平
        3.3.2 UBA2 在人胃癌組織中的臨床意義
    3.4 討論
    3.5 小結
第4章 UBA2對人胃癌細胞增殖、遷移、侵襲和化療敏感性影響的體外研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 主要試劑
        4.1.2 主要儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 實驗分組
        4.2.2 建立穩(wěn)定感染的胃癌細胞系
        4.2.3 Western blotting法檢測蛋白的表達情況
        4.2.4 MTT法檢測胃癌細胞增殖能力
        4.2.5 克隆形成實驗檢測胃癌細胞增殖能力
        4.2.6 流式細胞術檢測胃癌細胞周期
        4.2.7 細胞劃痕實驗檢測胃癌細胞遷移能力
        4.2.8 Transwell小室檢測胃癌細胞遷移和侵襲能力
        4.2.9 應用MTT檢測胃癌細胞順鉑化療敏感性
        4.2.10 統(tǒng)計學分析
    4.3 實驗結果
        4.3.1 慢病毒感染胃癌細胞后UBA2 的表達情況
        4.3.2 UBA2 對人胃癌細胞增殖的影響
        4.3.3 UBA2 對人胃癌細胞周期及周期相關蛋白表達的影響
        4.3.4 UBA2 對人胃癌細胞遷移和侵襲的影響
        4.3.5 UBA2 對人胃癌細胞侵襲及EMT相關蛋白表達的影響
        4.3.6 UBA2 對人胃癌細胞化療敏感性的影響
    4.4 討論
    4.5 小結
第5章 UBA2對Wnt/β-catenin和 Akt信號通路的作用機制探討
    5.1 實驗材料
        5.1.1 主要試劑
        5.1.2 主要儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 質粒的提取
        5.2.2 細胞瞬時轉染
        5.2.3 雙螢光素酶報告基因檢測
        5.2.4 Western blotting法檢測蛋白表達情況
        5.2.5 統(tǒng)計學分析
    5.3 實驗結果
        5.3.1 UBA2對Wnt/β-catenin信號通路的作用
        5.3.2 UBA2對Akt信號通路的作用
    5.4 討論
    5.5 小結
第6章 UBA2 對胃癌細胞移植瘤增殖影響的體內研究
    6.1 實驗材料
        6.1.1 主要試劑
        6.1.2 主要儀器
    6.2 實驗方法
        6.2.1 細胞及實驗動物
        6.2.2 實驗分組
        6.2.3 裸鼠皮下移植瘤模型建立及移植瘤標本處理
        6.2.4 Western blotting法檢測移植瘤蛋白表達情況
        6.2.5 統(tǒng)計學分析
    6.3 實驗結果
        6.3.1 UBA2 對胃癌細胞移植瘤生長的影響
        6.3.2 胃癌細胞移植瘤中周期相關蛋白的表達
    6.4 討論
    6.5 小結
第7章 結論
參考文獻
附錄
作者簡介及在學期間取得的科研成果
致謝



本文編號：3927431