發(fā)布時(shí)間：2024-03-13 19:02

　　背景和目的:胃癌是世界第4大常見的惡性腫瘤,在腫瘤導(dǎo)致的死亡原因中占第2位,在我國腫瘤發(fā)病率和腫瘤致死原因中亦占第2位,僅次于肺癌。目前,外科手術(shù)仍然是早期胃癌的主要治療方法。但是由于該病的高度異質(zhì)性、起病隱匿、發(fā)展迅速等特點(diǎn),大多數(shù)胃癌患者確診時(shí)已處于疾病的中晚期,往往需要聯(lián)合化療等其他治療手段。隨著對疾病病因、病理和分子機(jī)制等方面的認(rèn)識逐步加深,胃癌化療方案的選擇以及分子靶向藥物的研發(fā)有了一定進(jìn)展,但尚未取得顯著的效果。此外,療效的限制也可能與胃癌發(fā)生發(fā)展過程比較復(fù)雜,常常涉及多個(gè)基因、信號通路的改變有關(guān)。因此,進(jìn)一步闡明胃癌的發(fā)病機(jī)制,探索新的分子靶向藥物并使患者的生存受益,仍是胃癌治療中亟待解決的重點(diǎn)問題。小泛素相關(guān)修飾物(small ubiquitin-like modifiers,SUMOs)是一種新發(fā)現(xiàn)的泛素樣分子,它能夠可逆地修飾翻譯后的蛋白,具有調(diào)節(jié)靶蛋白穩(wěn)定性、定位及與其他蛋白相互作用的功能。多項(xiàng)研究指出SUMO化修飾參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。然而,泛素樣修飾物活化酶2(ubiquitin-like modifier activating enzyme 2,UBA2)作為...

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 文獻(xiàn)綜述
    2.1 胃癌的研究現(xiàn)況
        2.1.1 胃癌概述
        2.1.2 胃癌發(fā)病的分子機(jī)制
        2.1.3 胃癌治療的研究進(jìn)展
    2.2 UBA2 與腫瘤的發(fā)生發(fā)展
        2.2.1 UBA2 的功能與SUMO化循環(huán)
        2.2.2 UBA2和SUMO化修飾與腫瘤
        2.2.3 UBA2和SUMO化修飾與胃癌的發(fā)生發(fā)展
第3章 UBA2 在人胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 組織標(biāo)本來源
        3.2.2 免疫組織化學(xué)染色檢測UBA2 蛋白表達(dá)水平
        3.2.3 Western blotting法檢測蛋白表達(dá)
        3.2.4 TCGA數(shù)據(jù)庫中胃癌UBA2 m RNA水平
        3.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 人胃癌組織中UBA2 水平
        3.3.2 UBA2 在人胃癌組織中的臨床意義
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 UBA2對人胃癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和化療敏感性影響的體外研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 主要試劑
        4.1.2 主要儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)分組
        4.2.2 建立穩(wěn)定感染的胃癌細(xì)胞系
        4.2.3 Western blotting法檢測蛋白的表達(dá)情況
        4.2.4 MTT法檢測胃癌細(xì)胞增殖能力
        4.2.5 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞增殖能力
        4.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測胃癌細(xì)胞周期
        4.2.7 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞遷移能力
        4.2.8 Transwell小室檢測胃癌細(xì)胞遷移和侵襲能力
        4.2.9 應(yīng)用MTT檢測胃癌細(xì)胞順鉑化療敏感性
        4.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 慢病毒感染胃癌細(xì)胞后UBA2 的表達(dá)情況
        4.3.2 UBA2 對人胃癌細(xì)胞增殖的影響
        4.3.3 UBA2 對人胃癌細(xì)胞周期及周期相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        4.3.4 UBA2 對人胃癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響
        4.3.5 UBA2 對人胃癌細(xì)胞侵襲及EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        4.3.6 UBA2 對人胃癌細(xì)胞化療敏感性的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第5章 UBA2對Wnt/β-catenin和 Akt信號通路的作用機(jī)制探討
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 主要試劑
        5.1.2 主要儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 質(zhì)粒的提取
        5.2.2 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        5.2.3 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測
        5.2.4 Western blotting法檢測蛋白表達(dá)情況
        5.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 UBA2對Wnt/β-catenin信號通路的作用
        5.3.2 UBA2對Akt信號通路的作用
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第6章 UBA2 對胃癌細(xì)胞移植瘤增殖影響的體內(nèi)研究
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.1 主要試劑
        6.1.2 主要儀器
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)動物
        6.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        6.2.3 裸鼠皮下移植瘤模型建立及移植瘤標(biāo)本處理
        6.2.4 Western blotting法檢測移植瘤蛋白表達(dá)情況
        6.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.3.1 UBA2 對胃癌細(xì)胞移植瘤生長的影響
        6.3.2 胃癌細(xì)胞移植瘤中周期相關(guān)蛋白的表達(dá)
    6.4 討論
    6.5 小結(jié)
第7章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
作者簡介及在學(xué)期間取得的科研成果
致謝



本文編號：3927431