PI3K/AKT/mTOR信號通路在癌癥的發(fā)生和發(fā)展中起著重要的作用。胞蛋白激酶2(Casein kinase 2,CK2)是一種高度保守的具有多種底物的胞蛋白激酶,能夠參與腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移等生命過程。Y-box結(jié)合蛋白1(Y-box–binding protein-1,YBX1)在多種惡性腫瘤中高表達(dá),且與腫瘤的過度增殖、耐藥性及不良預(yù)后密切相關(guān)。已有研究表明,CK2α和YBX1均能夠調(diào)控PI3K/AKT/mTOR信號通路的活性。此外,通過人體蛋白質(zhì)參考數(shù)據(jù)庫(Human Protein Reference Database,HPRD)預(yù)測,CK2很有可能是YBX1的上游蛋白激酶,能夠磷酸化YBX1 165位的絲氨酸。因此,我們推測CK2與YBX1可能存在相互作用,共同調(diào)節(jié)PI3K/AKT/mTOR信號通路的活性。本課題擬探究CK2α和YBX1在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性;CK2α對YBX1表達(dá)的影響;CK2α和YBX1的相互作用;聯(lián)合抑制CK2α和YBX1對腫瘤細(xì)胞增殖、周期、遷移等表型以及耐藥能力的影響。主要研究結(jié)果如下:(1)CK2α和YBX1在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)具有一定的相關(guān)性。以...

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 蛋白激酶2(CK2)的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 CK2 的研究概述
        1.1.2 CK2 與腫瘤的關(guān)系
    1.2 Y-box結(jié)合蛋白1(YBX1)
        1.2.1 YBX1 的研究概述
        1.2.2 YBX1 與腫瘤的關(guān)系
    1.3 PI3K/AKT/mTOR信號通路
        1.3.1 PI3K/AKT/mTOR信號通路概述
        1.3.2 PI3K/AKT/mTOR信號通路與腫瘤的關(guān)系
    1.4 本研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 試劑
        2.1.2 引物
        2.1.3 菌株及細(xì)胞株
        2.1.4 重組質(zhì)粒
        2.1.5 常規(guī)溶液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 分子克隆實(shí)驗(yàn)
        2.2.2 蛋白純化
        2.2.3 質(zhì)粒定點(diǎn)突變
        2.2.4 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代及凍存
        2.2.5 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 細(xì)胞周期檢測
        2.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.8 蛋白質(zhì)免疫印跡
        2.2.9 裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 傷口愈合實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的構(gòu)建
        2.2.12 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        2.2.13 泛素化檢測實(shí)驗(yàn)
        2.2.14 Ni-NTA pull down實(shí)驗(yàn)
        2.2.15 雙熒光素報(bào)告基因活性檢測實(shí)驗(yàn)
        2.2.16 平板克隆實(shí)驗(yàn)
        2.2.17 免疫組化實(shí)驗(yàn)
        2.2.18 統(tǒng)計(jì)分析
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 CK2α和 YBX1 在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)具有一定的相關(guān)性
    3.2 CK2α能夠影響YBX1 的表達(dá)且依賴其激酶活性
    3.3 CK2α在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控YBX1 蛋白的表達(dá)
    3.4 聯(lián)合靶向抑制CK2α和 YBX1對PI3K/AKT/mTOR信號通路活性的影響
    3.5 聯(lián)合靶向抑制CK2α和 YBX1 對腫瘤細(xì)胞增殖的影響
    3.6 聯(lián)合靶向抑制CK2α和 YBX1 對腫瘤細(xì)胞克隆形成能力的影響
    3.7 聯(lián)合靶向抑制CK2α和 YBX1 對腫瘤細(xì)胞周期的影響
    3.8 聯(lián)合靶向抑制CK2α和 YBX1 對腫瘤細(xì)胞遷移的影響
    3.9 聯(lián)合抑制CK2α和 YBX1 對卵巢癌細(xì)胞在裸鼠皮下成瘤的影響
    3.10 YBX1對CK2α介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移的影響
    3.11 PI3K/AKT/mTOR通路對CK2α和 YBX1 介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移的影響
    3.12 聯(lián)合靶向抑制CK2α和 YBX1 對腫瘤細(xì)胞耐藥的影響
    3.13 CK2α和 YBX1 存在相互作用
第四章 討論
第五章 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3922931