第一部分 saRNA激活腎癌細胞E-cadherin基因表達及其機制目的:檢測腎癌細胞中的E-cadherin基因表達,觀察E-cadherin表達水平與腎癌發(fā)生的相關性。遴選能和E-cadherin基因啟動子區(qū)域序列互補的saRNAs,明確saRNA對腎癌細胞系ACHN和786-O細胞E-cadherin表達的激活效應。材料與方法:收集2016年8月²016年11月期間于瑞金醫(yī)院泌尿外科手術并經病理確診的15對“腎細胞癌”的癌組織及癌旁正常腎組織,采用免疫組化的方法了解石蠟切片中腎癌標本中E-cadherin表達;應用實時熒光定量PCR和Westernblot檢測15對臨床腎細胞癌組織和癌旁正常腎組織中E-cadherin基因的mRNA和蛋白表達水平;生物合成的dsControl,dsEad-215,siEcad+dsEcad-215(其中dsControl為陰性對照組,dsEad-215為實驗組,siEcad+dsEcad-215為干擾組)通過脂質體轉染腎癌細胞系ACHN和786-O細胞,72小時后采用實時熒光定量PCR和Westernblot分別檢測兩株腎癌...

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1（A）.轉膜所用“三明治”結構

上海交通大學醫(yī)學院2019同等學力博士研究生畢業(yè)論文-22-另外，在兩旁上樣孔內加入5μL的蛋白marker。5）電泳：樣品變性后上樣，連接電極，插入電源插座，開啟電泳儀的電源開關，初始電壓80V，進行恒壓電泳，約30min跑積層膠，當溴酚藍進入到分離膠中將電壓調至120V繼續(xù)恒....

圖1（B）.蛋白分子量marker指示條帶④將轉膜夾（放入“三明治”）安裝在轉膜槽上，辨清轉膜槽正負極（轉膜夾的

上海交通大學醫(yī)學院2019同等學力博士研究生畢業(yè)論文-23-圖1（B）.蛋白分子量marker指示條帶④將轉膜夾（放入“三明治”）安裝在轉膜槽上，辨清轉膜槽正負極（轉膜夾的黑色面對應轉膜槽黑色面，轉膜夾的白色面對應轉膜槽紅色面），向轉膜槽內加轉膜緩沖液，蓋上轉膜槽蓋子，將轉膜槽置....

圖2.細胞培養(yǎng)板（研究組及對照組分布安排）

上海交通大學醫(yī)學院2019同等學力博士研究生畢業(yè)論文-30-15mL的離心管中，予以900r/s，離心3min（普通離心機），加入1mL培養(yǎng)液重懸，形成細胞懸液，將細胞進行鋪板（接種于6孔的細胞培養(yǎng)板）。每孔接種約1×105個細胞，保證轉染時細胞的融合度（confluence）達....

圖4（A）.15對配對臨床腎細胞癌和癌旁正常腎組織的E-cadherinmRNA表達水平差異

上海交通大學醫(yī)學院2019同等學力博士研究生畢業(yè)論文-39-圖4（A）.15對配對臨床腎細胞癌和癌旁正常腎組織的E-cadherinmRNA表達水平差異圖4（B）.免疫組化顯示腎癌細胞和癌旁正常腎組織的E-cadherin蛋白表達差異圖4（C）.Westernblot顯示腎癌細胞....

本文編號：3895929