第一部分 saRNA激活腎癌細(xì)胞E-cadherin基因表達(dá)及其機(jī)制目的:檢測(cè)腎癌細(xì)胞中的E-cadherin基因表達(dá),觀察E-cadherin表達(dá)水平與腎癌發(fā)生的相關(guān)性。遴選能和E-cadherin基因啟動(dòng)子區(qū)域序列互補(bǔ)的saRNAs,明確saRNA對(duì)腎癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN和786-O細(xì)胞E-cadherin表達(dá)的激活效應(yīng)。材料與方法:收集2016年8月²016年11月期間于瑞金醫(yī)院泌尿外科手術(shù)并經(jīng)病理確診的15對(duì)“腎細(xì)胞癌”的癌組織及癌旁正常腎組織,采用免疫組化的方法了解石蠟切片中腎癌標(biāo)本中E-cadherin表達(dá);應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Westernblot檢測(cè)15對(duì)臨床腎細(xì)胞癌組織和癌旁正常腎組織中E-cadherin基因的mRNA和蛋白表達(dá)水平;生物合成的dsControl,dsEad-215,siEcad+dsEcad-215(其中dsControl為陰性對(duì)照組,dsEad-215為實(shí)驗(yàn)組,siEcad+dsEcad-215為干擾組)通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染腎癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN和786-O細(xì)胞,72小時(shí)后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Westernblot分別檢測(cè)兩株腎癌...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1（A）.轉(zhuǎn)膜所用“三明治”結(jié)構(gòu)

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2019同等學(xué)力博士研究生畢業(yè)論文-22-另外，在兩旁上樣孔內(nèi)加入5μL的蛋白marker。5）電泳：樣品變性后上樣，連接電極，插入電源插座，開啟電泳儀的電源開關(guān)，初始電壓80V，進(jìn)行恒壓電泳，約30min跑積層膠，當(dāng)溴酚藍(lán)進(jìn)入到分離膠中將電壓調(diào)至120V繼續(xù)恒....

圖1（B）.蛋白分子量marker指示條帶④將轉(zhuǎn)膜夾（放入“三明治”）安裝在轉(zhuǎn)膜槽上，辨清轉(zhuǎn)膜槽正負(fù)極（轉(zhuǎn)膜夾的

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2019同等學(xué)力博士研究生畢業(yè)論文-23-圖1（B）.蛋白分子量marker指示條帶④將轉(zhuǎn)膜夾（放入“三明治”）安裝在轉(zhuǎn)膜槽上，辨清轉(zhuǎn)膜槽正負(fù)極（轉(zhuǎn)膜夾的黑色面對(duì)應(yīng)轉(zhuǎn)膜槽黑色面，轉(zhuǎn)膜夾的白色面對(duì)應(yīng)轉(zhuǎn)膜槽紅色面），向轉(zhuǎn)膜槽內(nèi)加轉(zhuǎn)膜緩沖液，蓋上轉(zhuǎn)膜槽蓋子，將轉(zhuǎn)膜槽置....

圖2.細(xì)胞培養(yǎng)板（研究組及對(duì)照組分布安排）

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2019同等學(xué)力博士研究生畢業(yè)論文-30-15mL的離心管中，予以900r/s，離心3min（普通離心機(jī)），加入1mL培養(yǎng)液重懸，形成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞進(jìn)行鋪板（接種于6孔的細(xì)胞培養(yǎng)板）。每孔接種約1×105個(gè)細(xì)胞，保證轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的融合度（confluence）達(dá)....

圖4（A）.15對(duì)配對(duì)臨床腎細(xì)胞癌和癌旁正常腎組織的E-cadherinmRNA表達(dá)水平差異

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2019同等學(xué)力博士研究生畢業(yè)論文-39-圖4（A）.15對(duì)配對(duì)臨床腎細(xì)胞癌和癌旁正常腎組織的E-cadherinmRNA表達(dá)水平差異圖4（B）.免疫組化顯示腎癌細(xì)胞和癌旁正常腎組織的E-cadherin蛋白表達(dá)差異圖4（C）.Westernblot顯示腎癌細(xì)胞....

本文編號(hào)：3895929