腫瘤正成為威脅人類生命安全的主要因素之一,而乳腺癌在女性中發(fā)病率位居第一位,致死率也高居第二位,乳腺癌正成為威脅女性健康的重要?dú)⑹�。乳腺癌根�?jù)ErbB2、ER、PR表達(dá)情況,將其分為三類:Luminal型、基底樣型和ErbB2陽性乳腺癌,ErbB2 陽型乳腺癌大約占20-30%。目前針對(duì)ErbB2陽性乳腺癌除傳統(tǒng)手術(shù)治療外,靶向藥物提供了全新希望,靶向ErbB2藥物大概分為單克隆抗體、小分子酪氨酸激酶抑制劑以及HSP90抑制劑類等。單克隆抗體類藥物的典型代表為赫賽汀,酪氨酸激酶的抑制劑主要有拉帕替尼、來那替尼,都已被FDA批準(zhǔn)上市應(yīng)用,其主要通過阻斷ErbB2的下游信號(hào)通路,從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖以達(dá)到治療乳腺癌的作用。ErbB2/Her2是乳腺癌治療的重要靶向蛋白,其突變經(jīng)常導(dǎo)致耐藥和腫瘤復(fù)發(fā)。近年來的研究提示通過促進(jìn)ErbB2泛素化和降解預(yù)期會(huì)減少耐藥發(fā)生并提升治療效果,但乳腺癌中ErbB2泛素化和降解的調(diào)控機(jī)制還不明確。在我們前期研究中發(fā)現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞中泛素化的ErbB2被內(nèi)吞到早期內(nèi)體,經(jīng)由晚期內(nèi)體被轉(zhuǎn)運(yùn)到溶酶體進(jìn)行降解;通過篩選內(nèi)體系統(tǒng)上去泛素化酶,前期實(shí)驗(yàn)鑒定了調(diào)控泛素化Er...

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
實(shí)驗(yàn)一 USP2抑制乳腺癌中ErbB2泛素化誘導(dǎo)的內(nèi)吞降解
    前言
    材料和方法
        1. 材料
            1.1 主要儀器與設(shè)備
            1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑及抗體
            1.3 試劑配制
        2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 Western blotting檢測(cè)
            2.3 免疫熒光
            2.4 免疫共沉淀
            2.5 shRNA慢病毒包裝
            2.6 質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
            2.7 RNA提取
            2.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            2.9 USP2CRISPR-Cas9敲降細(xì)胞系構(gòu)建
            2.10 EGFP-DUB融合蛋白分子構(gòu)建
            2.11 轉(zhuǎn)化
            2.12 乳腺癌小鼠移植瘤模型構(gòu)建
            2.13 克隆形成
            2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1. 調(diào)控ErbB2動(dòng)態(tài)泛素化的去泛素化酶篩選
        2. USP2與ErbB2相互作用且USP2過表達(dá)可以抑制ErbB2內(nèi)吞
        3. USP2敲降抑制細(xì)胞增殖同時(shí)降低ErbB2穩(wěn)定性
        4. USP2抑制劑ML364可以降低ErbB2蛋白穩(wěn)定性
        5. USP2負(fù)向調(diào)控ErbB2泛素化
        6. USP2為ErbB2陽性乳腺癌治療提供新的治療策略
        7. USP2抑制劑抑制ErbB2陽性乳腺癌生長
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
    英文縮寫
實(shí)驗(yàn)二 細(xì)胞膜膽固醇含量維持膜表面ErbB2的水平并為ErbB2陽性乳腺癌治療提供契機(jī)
    前言
    材料和方法
        1. 材料
            1.1 主要儀器與設(shè)備
            1.2 主要試劑和抗體
            1.3 細(xì)胞系及動(dòng)物
        2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 Western blotting檢測(cè)
            2.3 免疫熒光
            2.4 免疫共沉淀
            2.5 MTT測(cè)定細(xì)胞增殖能力實(shí)驗(yàn)
            2.6 劃痕實(shí)驗(yàn)
            2.7 細(xì)胞膽固醇染色方法
            2.8 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            2.9 組織蛋白提取
            2.10 小鼠成瘤模型建立
            2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1. 細(xì)胞膜中膽固醇含量與ErbB2定位和細(xì)胞遷移有關(guān)
        2. 膽固醇豐度維持細(xì)胞表面的ErbB2水平
        3. 降低膽固醇藥物增強(qiáng)ErbB2靶向劑抑制乳腺癌生長作用
        4. 洛伐他汀促進(jìn)ErbB2泛素化介導(dǎo)的內(nèi)吞降解
        5. 洛伐他汀與拉帕替尼協(xié)同抑制ErbB2陽性乳腺癌生長
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
    附錄
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況
致謝



本文編號(hào)：3843471