發(fā)布時(shí)間：2023-08-25 20:14

　　目的:通過篩選、驗(yàn)證肺腺癌LM相關(guān)的CSF miRNAs,尋找具有LM診斷價(jià)值及監(jiān)測疾病狀態(tài)潛能的特異性CSF miRNA分子標(biāo)志物,初步探究其生物學(xué)功能。方法:1.通過miRNA表達(dá)譜芯片檢測肺腺癌LM患者、肺腺癌腦轉(zhuǎn)移及非腫瘤性疾病患者的miRNA表達(dá),同時(shí)檢測肺腺癌LM患者初診時(shí)及治療后CSF樣本miRNA表達(dá)譜變化,以篩選肺腺癌LM相關(guān)的CSF miRNAs。2.利用q RT-PCR方法在獨(dú)立的肺腺癌LM患者、肺腺癌腦轉(zhuǎn)移及非腫瘤性疾病患者群體的CSF樣本中檢測候選miRNAs表達(dá)變化是否與miRNAs芯片篩查結(jié)果一致。3.通過q RT-PCR方法檢測及受試者工作特征曲線(ROC曲線)分析,在可疑存在LM的肺腺癌患者中檢驗(yàn)候選CSF miRNA在LM診斷中的敏感性及特異性,并與傳統(tǒng)的CSF細(xì)胞學(xué)檢查及影像學(xué)檢查方法進(jìn)行比較,尋找具有診斷潛能的CSF miRNA分子標(biāo)志物。4.通過q RT-PCR方法檢測肺腺癌LM患者初診時(shí)、治療后、復(fù)發(fā)時(shí)及挽救治療后CSF中候選miRNAs表達(dá)水平的變化,明確特異性CSF miRNAs是否具有作為LM疾病狀態(tài)監(jiān)測標(biāo)志物的潛能。5.通過轉(zhuǎn)染miR...

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
Abstract
中英文縮略詞對照表
第1章 引言
第2章 綜述
第3章 材料與方法
    3.1 腦脊液樣本來源及納入標(biāo)準(zhǔn)
        3.1.1 研究設(shè)計(jì)流程
        3.1.2 肺腺癌LM患者腦脊液樣本的來源
        3.1.3 肺腺癌LM患者腦脊液樣本的獲取
        3.1.4 其他疾病患者腦脊液樣本的獲取
        3.1.5 腦脊液樣本的處理與保存
        3.1.6 肺腺癌LM患者臨床資料的收集
    3.2 主要試劑和器材
        3.2.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 細(xì)胞系及細(xì)胞培養(yǎng)
    3.4 主要實(shí)驗(yàn)方法
        3.4.1 CSF標(biāo)本RNA的提取
        3.4.2 CSF miRNA表達(dá)譜芯片檢測
        3.4.3 細(xì)胞傳代、凍存及復(fù)蘇
        3.4.4 miRNAmimics及inhibitors的轉(zhuǎn)染
        3.4.5 細(xì)胞miRNA及RNA提取與濃度測定
        3.4.6 Real-time qPCR檢測miRNA表達(dá)
        3.4.7 Real-time qPCR檢測mRNA表達(dá)
        3.4.8 MTT法檢測細(xì)胞增殖
        3.4.9 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力
        3.4.10 Transwell檢測細(xì)胞侵襲能力
        3.4.11 miRNA靶基因的生物信息學(xué)分析
        3.4.12 Western blot方法檢測蛋白表達(dá)
        3.4.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第4章 結(jié)果
    4.1 肺腺癌LM患者與非LM患者的一般情況
    4.2 肺腺癌LM相關(guān)CSF miRNAs的篩選
        4.2.1 肺腺癌LM較非LM患者CSF中miRNAs表達(dá)譜差異分析
        4.2.2 肺腺癌LM患者治療前后CSF中miRNAs表達(dá)譜差異分析
    4.3 肺腺癌LM相關(guān)CSF miRNAs的驗(yàn)證
    4.4 肺腺癌LM相關(guān)CSF miRNAs診斷LM效能的評價(jià)
    4.5 肺腺癌LM相關(guān)CSF miRNAs與LM病情變化之間的關(guān)系
    4.6 miR-7977 對肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
        4.6.1 miR-7977 在肺腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況
        4.6.2 miR-7977 mimics及inhibitors轉(zhuǎn)染肺腺癌細(xì)胞
        4.6.3 miR-7977 對肺腺癌細(xì)胞增殖能力的影響
        4.6.4 miR-7977 對肺腺癌細(xì)胞遷移能力的影響
        4.6.5 miR-7977 對肺腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響
    4.7 miR-7977 下游靶基因的預(yù)測分析
    4.8 miR-7977 對肺腺癌細(xì)胞PCBP1表達(dá)的影響
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3843242