癌癥是嚴(yán)重危害全球人類生命健康的主要公共衛(wèi)生問(wèn)題,根據(jù)世界衛(wèi)生組織發(fā)布的全球癌癥報(bào)告,預(yù)計(jì)到2035年全球腫瘤患者將達(dá)到2400萬(wàn)人。結(jié)腸癌作為一種常見(jiàn)消化道惡性腫瘤,在2018年其死亡率約為11.6%,成為癌癥相關(guān)性死亡的第二大因素。近年來(lái),隨著生活水平的提高和飲食習(xí)慣的改變,我國(guó)已成為結(jié)腸癌的高發(fā)地區(qū)。結(jié)腸癌目前的臨床治療(手術(shù)結(jié)合放射性及化學(xué)療法)具有一定局限性,而傳統(tǒng)化療藥物的毒副作用是導(dǎo)致患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移以及預(yù)后差的主要原因。天然產(chǎn)物功能分子以其明確的抗癌活性、多靶點(diǎn)、低毒性等優(yōu)勢(shì),一直以來(lái)都是抗癌藥物篩選的重要資源。燕麥(Avena sativa L.)是一年生禾本科植物,種植資源豐富,是一種世界性栽培作物。燕麥?zhǔn)歉吆貐^(qū)重要的糧飼兼用作物,富含β-葡聚糖、燕麥皂苷、黃酮、維生素及燕麥生物堿(AVNs)等多種生物活性成分;并具有多種保健功能,如降低心血管疾病發(fā)生、降低II型糖尿病及消化道疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,食用全谷物食品可有效預(yù)防結(jié)腸癌的發(fā)生。目前臨床應(yīng)用最為廣泛的植物源抗腫瘤藥物主要是生物堿類,如長(zhǎng)春新堿,以高效低毒等特點(diǎn)受到廣泛認(rèn)可,成為多種腫瘤治療的首選...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    概述
    1 天然產(chǎn)物抗腫瘤研究現(xiàn)狀
        1.1 天然產(chǎn)物是抗腫瘤藥物研發(fā)的重要資源
        1.2 天然產(chǎn)物抗腫瘤活性分子
    2 燕麥及燕麥生物堿
        2.1 燕麥生物活性物質(zhì)及功能
            2.1.1 燕麥對(duì)心血管疾病的有益作用
            2.1.2 燕麥對(duì)II型糖尿病的有益作用
            2.1.3 燕麥對(duì)腸道疾病的有益作用
        2.2 燕麥生物堿
            2.2.1 燕麥生物堿的穩(wěn)定性
            2.2.2 AVNs有益于人類健康的生物學(xué)活性
    3 腫瘤靶向治療策略
        3.1 氧化還原穩(wěn)態(tài)與腫瘤治療
        3.2 細(xì)胞衰老與腫瘤治療
            3.2.1 細(xì)胞衰老的特征
            3.2.2 細(xì)胞衰老過(guò)程中調(diào)控生長(zhǎng)停滯的分子機(jī)制
            3.2.3 靶向細(xì)胞衰老的腫瘤治療策略
        3.3 化療耐藥與腫瘤治療
            3.3.1 化療耐藥的分子機(jī)制
            3.3.2 表觀遺傳失調(diào)與化療耐藥
            3.3.3 表觀遺傳藥物在腫瘤化療耐藥中的治療策略
    4 本課題的研究意義及研究?jī)?nèi)容
第二章 燕麥生物堿AVNs的制備及其抗腫瘤活性評(píng)價(jià)
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 儀器及試劑
            2.2.1 儀器
            2.2.2 試劑及配制
        2.3 AVNs提取及純化
            2.3.1 AVNs提取條件優(yōu)化
            2.3.2 AVNs大孔樹(shù)脂純化及定性、定量分析
            2.3.3 HPLC-MS
        2.4 AVNs抗結(jié)腸癌活性檢測(cè)
            2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
            2.4.2 細(xì)胞凍存及復(fù)蘇
            2.4.3 MTT實(shí)驗(yàn)
            2.4.4 EdU實(shí)驗(yàn)
            2.4.5細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
            2.4.6裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
            2.4.7 免疫組織化學(xué)染色
            2.4.8 蘇木精-伊紅染色
        2.5 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果分析
    3 結(jié)果
        3.1 AVNs提取最適條件選擇
        3.2 AVNs得率及主要成分鑒定
        3.3 AVNs抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的活力
        3.4 AVNs抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖
        3.5 AVNs抑制小鼠腫瘤生長(zhǎng)
    4 討論
    5 小結(jié)
第三章 AVNs靶向DDX3 觸發(fā)活性氧應(yīng)激誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 儀器及試劑
            2.2.1 儀器
            2.2.2 試劑及配制
        2.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        2.4 免疫熒光染色
        2.5 透射電子顯微鏡觀察線粒體形態(tài)
        2.6 細(xì)胞有氧呼吸水平檢測(cè)
        2.7 Western blot
        2.8 細(xì)胞活性氧水平檢測(cè)
        2.9 線粒體膜電位檢測(cè)
        2.10 免疫組織化學(xué)
        2.11 熒光定量PCR
        2.12 細(xì)胞凋亡
        2.13 細(xì)胞線粒體分離
        2.14 DDX3 真核表達(dá)載體構(gòu)建
        2.15 MTT實(shí)驗(yàn)
        2.16 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果分析
    3 結(jié)果
        3.1 AVNs引起線粒體形態(tài)腫脹
        3.2 AVNs抑制線粒體的氧化磷酸化
        3.3 AVNs誘發(fā)ROS應(yīng)激導(dǎo)致的結(jié)腸癌細(xì)胞內(nèi)源性凋亡
        3.4 DDX3 在結(jié)腸癌中高表達(dá)
        3.5 AVNs促進(jìn)DDX3 蛋白泛素化降解
        3.6 AVNs通過(guò)抑制DDX3 觸發(fā)ROS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡
    4 討論
    5 小結(jié)
第四章 AVN A是 AVNs中靶向DDX3 抗結(jié)腸癌的有效成分
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 儀器及試劑
            2.2.1 儀器
            2.2.2 試劑
        2.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        2.4 DDX3 及其截短體原核表達(dá)載體構(gòu)建
        2.5 DDX3 及其截短體蛋白的表達(dá)純化
        2.6 DDX3 突變體真核表達(dá)載體構(gòu)建
        2.7 細(xì)胞活性氧水平檢測(cè)
        2.8 Biacore生物分子相互作用分析
        2.9 HPLC-MS
        2.10 ATP酶活性檢測(cè)
        2.11 ¹H NMR
        2.12 MTT實(shí)驗(yàn)
        2.13 Western blot
        2.14 小鼠原位結(jié)腸癌模型構(gòu)建
        2.15 血清代謝組學(xué)
        2.16 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果分析
    3 結(jié)果
        3.1 AVN A是 AVNs中的有效抗結(jié)腸癌活性成分
        3.2 AVN A與 DDX3 Helicase結(jié)構(gòu)域相互作用
        3.3 DDX3的R287和R294是AVN A的結(jié)合位點(diǎn)
        3.4 AVN A抑制AOM/DSS模型小鼠腫瘤的生長(zhǎng)
        3.5 AVN A影響小鼠線粒體能量代謝
    4 討論
    5 小結(jié)
第五章 AVN A通過(guò)上調(diào)mi R-129-3p/Pirh2/p53 信號(hào)誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞衰老
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 儀器及試劑
            2.2.1 儀器
            2.2.2 試劑
        2.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        2.4 免疫組織化學(xué)及H&E染色
        2.5 細(xì)胞周期檢測(cè)
        2.6 SA-β-gal活性檢測(cè)
        2.7 Western blot
        2.8 熒光定量PCR
        2.9 mRNA穩(wěn)定性檢測(cè)
        2.10 熒光素酶實(shí)驗(yàn)
        2.11 RNA干擾
        2.12 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果分析
    3 結(jié)果
        3.1 AVN A處理可誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞衰老
        3.2 AVN A促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞p21 的轉(zhuǎn)錄表達(dá)
        3.3 AVN A通過(guò)抑制p53 泛素連接酶Pirh2 從而促進(jìn)p53 表達(dá)
        3.4 AVN A通過(guò)活化miR-129-3p/Pirh2/p53 信號(hào)軸促進(jìn)細(xì)胞衰老
        3.5 AVN A對(duì)于正常細(xì)胞及組織沒(méi)有明顯的毒副作用
    4 討論
    5 小結(jié)
第六章 AVN A通過(guò)KDM4C/mir-17-92/Bim信號(hào)通路增強(qiáng)結(jié)腸癌對(duì)5-FU化療敏感性
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 儀器及試劑
            2.2.1 儀器
            2.2.2 試劑
        2.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        2.4 MTT實(shí)驗(yàn)
        2.5 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.6 細(xì)胞凋亡
        2.7 Western blot
        2.8 mRNA穩(wěn)定性檢測(cè)
        2.9 熒光定量PCR
        2.10 載體構(gòu)建
        2.11 熒光素酶實(shí)驗(yàn)
        2.12 染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP)
        2.13 免疫組織化學(xué)和H&E染色
        2.14 熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)
        2.15 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.16 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果分析
    3 結(jié)果
        3.1 AVN A提高結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)5-FU的化療敏感性
        3.2 AVN A抑制miR-92a從而促進(jìn)Bim表達(dá)
        3.3 AVN A抑制結(jié)腸癌細(xì)胞miR-17-92 簇表達(dá)
        3.4 組蛋白去甲基化酶KDM4C在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控MIR17HG表達(dá)
        3.5 KDM4C/miR-17-92是AVN A和5-FU聯(lián)合治療結(jié)腸癌的有效靶點(diǎn)
        3.6 AVN A和5-FU聯(lián)合治療抑制小鼠腫瘤生長(zhǎng)
    4 討論
    5 小結(jié)
總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
縮略詞表
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)況及聯(lián)系方式



本文編號(hào)：3838591