氧化鐵納米顆粒(Iron oxide nanoparticles,IONPs)因其獨(dú)特的理化性質(zhì)和良好的生物相容性,在細(xì)胞分選、MRI造影、磁熱療、藥物遞送載體、診斷等生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。當(dāng)氧化鐵納米材料在體內(nèi)應(yīng)用時(shí),往往經(jīng)免疫調(diào)理作用被單核巨噬細(xì)胞識(shí)別并快速清除,或逐漸富集在肝、脾等器官。因此,單核巨噬細(xì)胞對(duì)氧化鐵納米材料的快速清除作用是其體內(nèi)應(yīng)用的主要障礙之一,相關(guān)研究也受到了廣泛關(guān)注。MIM(missing in metastasis)蛋白又稱為MTSS1,是一種在單核、巨噬細(xì)胞中高表達(dá)的膜相關(guān)蛋白,隸屬于BAR蛋白質(zhì)家族,可同時(shí)調(diào)控細(xì)胞膜的形變和細(xì)胞骨架的重構(gòu)。巨噬細(xì)胞對(duì)納米顆粒的內(nèi)吞需要膜形變和細(xì)胞骨架的重構(gòu)兩個(gè)過(guò)程同時(shí)進(jìn)行。因此,研究MIM與巨噬細(xì)胞內(nèi)吞IONPs的作用機(jī)制,對(duì)氧化鐵納米顆粒進(jìn)入體內(nèi)的歸宿、延長(zhǎng)循環(huán)時(shí)間及靶向應(yīng)用具有非常重要的意義。本論文的具體工作包括以下幾個(gè)方面:(1)系統(tǒng)探討氧化鐵納米顆粒進(jìn)入巨噬細(xì)胞后的生物學(xué)效應(yīng)。首先對(duì)IONPs進(jìn)行生物安全性評(píng)價(jià),通過(guò)MTT、Annexin V-FITC/PI凋亡、ROS等方法檢測(cè)其細(xì)胞毒性。顯微觀察ION...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
本論文主要專用術(shù)語(yǔ)注釋表
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)簡(jiǎn)介
        1.2.1 單核巨噬細(xì)胞的來(lái)源
        1.2.2 單核巨噬細(xì)胞的生物學(xué)功能
        1.2.3 巨噬細(xì)胞的分類
    1.3 納米材料與單核巨噬細(xì)胞的作用
        1.3.1 生物醫(yī)用納米材料
        1.3.2 氧化鐵納米材料
        1.3.3 單核巨噬細(xì)胞對(duì)納米材料的內(nèi)吞
    1.4 MIM蛋白研究進(jìn)展
        1.4.1 BAR蛋白質(zhì)超家族的簡(jiǎn)介
        1.4.2 BAR家族蛋白和內(nèi)吞
        1.4.3 MIM蛋白的研究進(jìn)展
    1.5 本論文的主要研究工作和創(chuàng)新點(diǎn)
第二章 攝入氧化鐵納米材料對(duì)單核巨噬細(xì)胞的影響
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        2.2.2 氧化鐵納米顆粒的制備與表征
        2.2.3 細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng)及凍存
        2.2.4 巨噬細(xì)胞攝取氧化鐵納米顆粒的測(cè)定
        2.2.5 細(xì)胞毒性測(cè)定
        2.2.6 單核細(xì)胞分化檢測(cè)
        2.2.7 巨噬細(xì)胞RNA的提取
        2.2.8 熒光定量PCR檢測(cè)
        2.2.9 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 氧化鐵納米顆粒的表征
        2.3.2 巨噬細(xì)胞對(duì)納米材料的攝入
        2.3.3 氧化鐵納米顆粒對(duì)巨噬細(xì)胞的安全性評(píng)價(jià)
        2.3.4 氧化鐵納米顆粒對(duì)單核細(xì)胞分化的影響
        2.3.5 攝入氧化鐵納米顆粒對(duì)巨噬細(xì)胞鐵代謝的影響
    2.4 本章小結(jié)
第三章 MIM蛋白通過(guò)與PI(4,5)P2 的作用參與細(xì)胞內(nèi)吞
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        3.2.2 MIM及 I-BAR過(guò)表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建
        3.2.3 細(xì)胞內(nèi)ATP和 ATP酶活性檢測(cè)
        3.2.4 膜電位的檢測(cè)
        3.2.5 細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測(cè)
        3.2.6 IP3 的檢測(cè)
        3.2.7 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        3.2.8 免疫共沉淀法檢測(cè)蛋白之間的相互作用
        3.2.9 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 細(xì)胞系的構(gòu)建
        3.3.2 MIM通過(guò)二聚化影響細(xì)胞膜電位
        3.3.3 MIM對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
        3.3.4 MIM介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的鈣離子釋放
    3.4 本章小結(jié)
第四章 MIM通過(guò)網(wǎng)格蛋白促進(jìn)巨噬細(xì)胞RAW264.7 對(duì)氧化鐵納米顆粒的內(nèi)吞
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        4.2.2 RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.2.3 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        4.2.4 質(zhì)粒抽提
        4.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.2.6 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        4.2.7 鈣黃綠素?zé)晒獯銣绶z測(cè)氧化鐵納米顆粒
        4.2.8 普魯士藍(lán)染色
        4.2.9 SSC法測(cè)RAW264.7 對(duì)氧化鐵納米顆粒攝取
        4.2.10 鄰二氮菲法測(cè)RAW264.7 對(duì)氧化鐵納米顆粒攝取
        4.2.11 流式細(xì)胞儀檢測(cè)RAW264.7 內(nèi)吞氧化鐵納米顆粒的途徑
        4.2.12 熒光共聚焦檢測(cè)蛋白之間的共定位
        4.2.13 免疫共沉淀法檢測(cè)MIM與網(wǎng)格蛋白之間的相互作用
        4.2.14 分子動(dòng)力學(xué)模擬MIM和網(wǎng)格蛋白clathrin之間的結(jié)合
        4.2.15 數(shù)據(jù)分析
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 沉默MIM對(duì) RAW264.7 細(xì)胞吞噬納米顆粒的影響
        4.3.2 過(guò)表達(dá)MIM對(duì) RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)吞納米顆粒的影響
        4.3.3 RAW264.7 攝取氧化鐵納米顆粒的內(nèi)吞途徑
        4.3.4 MIM與 clathrin熒光共定位的研究
        4.3.5 MIM和 clathrin的免疫共沉淀分析
        4.3.6 MIM的結(jié)構(gòu)域與clathrin的共定位研究
    4.4 本章小結(jié)
第五章 MIM參與氧化鐵納米顆粒胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的研究
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)部分
        5.2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        5.2.2 材料表征
        5.2.3 透射電鏡觀察納米顆粒細(xì)胞內(nèi)的定位
        5.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)
        5.2.5 免疫熒光標(biāo)記檢測(cè)MIM的細(xì)胞內(nèi)分布
        5.2.6 免疫共沉淀法檢測(cè)MIM與 Rab蛋白之間的相互作用
        5.2.7 免疫熒光檢測(cè)蛋白之間的共定位
        5.2.8 數(shù)據(jù)分析
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 納米材料對(duì)MIM細(xì)胞內(nèi)分布的影響
        5.3.2 MIM蛋白和Rab5、Rab7 相互作用的分析
        5.3.3 MIM和溶酶體共定位的分析
    5.4 本章小結(jié)
第六章 總結(jié)和展望
    6.1 論文總結(jié)
    6.2 工作展望
參考文獻(xiàn)
攻讀博士期間的學(xué)術(shù)成果
致謝



本文編號(hào)：3838819