發(fā)布時間：2023-07-28 10:24

　　根據(jù)GLOBOCAN的相關(guān)數(shù)據(jù)顯示,癌癥發(fā)病率和死亡率在世界范圍內(nèi)迅猛增長。同時,遺傳學(xué)和流行病學(xué)的研究發(fā)現(xiàn),癌癥的發(fā)生與基因變異及生活環(huán)境相關(guān)。例如,紫外輻射以及煙霧可以誘導(dǎo)TP53、CDKN2A、RAC1等基因變異,從而增加黑色素瘤和肺癌的風(fēng)險指數(shù)。因此,從遺傳變異和環(huán)境的角度綜合探討癌癥發(fā)生、發(fā)展對今后癌癥的預(yù)防與治療十分必要。研究發(fā)現(xiàn)TP53及其負(fù)控因子MDM2的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)與癌癥風(fēng)險指數(shù)顯著相關(guān)。在東亞人群中,TP53 SNP rs1042522G的頻率與冬季最低氣溫呈負(fù)相關(guān),MDM2SNP rs2279744G的頻率與紫外線輻射強(qiáng)度呈負(fù)相關(guān),這提示該地區(qū)人群肺癌、乳腺癌以及眼癌的易感性與環(huán)境因素之間密切相關(guān),為解釋人群癌癥的發(fā)生提供了群體遺傳學(xué)證據(jù)。與MDM2類似,另一個負(fù)調(diào)控因子MDM4在癌癥中突變較罕見,且高表達(dá)于多種癌癥之中,其中rs4245739A與東亞人群肺癌、乳腺癌等癌癥風(fēng)險的增加顯著相關(guān)。然而,MDM4癌癥易感性相關(guān)SNP位點與環(huán)境因素相關(guān)性的研究鮮見報道�；诖�,本項研究調(diào)查了64個東亞群體,總計3694個個體的rs4245739的基因型,發(fā)現(xiàn)易感位點rs424...

【文章頁數(shù)】：127 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語
第一章 緒論
    1.1 癌癥的現(xiàn)狀
    1.2 遺傳因素以及環(huán)境差異與癌癥的關(guān)系
    1.3 癌癥的預(yù)防和化學(xué)治療
    1.4 展望
第二章 東亞人群rs4245739 位點與環(huán)境因素關(guān)系的研究
    2.1 引言
    2.2 實驗試劑與設(shè)備
        2.2.1 實驗試劑
        2.2.2 實驗儀器設(shè)備
        2.2.3 試劑配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 人血液基因組DNA的提取
        2.3.2 SNaPshot法對rs4245739 進(jìn)行分型
            2.3.2.1 引物設(shè)計
            2.3.2.2 PCR擴(kuò)增含有rs424539 的片段
            2.3.2.3 PCR產(chǎn)物的純化
            2.3.2.4 單堿基引物延伸反應(yīng)(SNaPshot反應(yīng))
            2.3.2.5 SNaPshot產(chǎn)物的純化
            2.3.2.6 測序結(jié)果的檢測與判讀
        2.3.3 測序驗證rs4245739 分型結(jié)果
            2.3.3.1 PCR擴(kuò)增含有rs424539 的片段
            2.3.3.2 PCR產(chǎn)物的純化
            2.3.3.3 測序PCR反應(yīng)
            2.3.3.4 測序反應(yīng)產(chǎn)物純化
        2.3.4 環(huán)境因素數(shù)據(jù)的搜集
        2.3.5 數(shù)據(jù)的處理
            2.3.5.1 rs4245739 基因頻率的計算
            2.3.5.2 采樣點樣本Hardy-Weinberg平衡檢驗
            2.3.5.3 rs4245739A頻率與自然因素相關(guān)性分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 采樣點分布與民族種類
        2.4.2 rs4245739A頻率、自然因素及Hardy-Weiberg平衡結(jié)果
        2.4.3 rs4245739A頻率與環(huán)境因素相關(guān)性分析結(jié)果
    2.5 討論
第三章 化合物3u在黑色素瘤細(xì)胞A375 中激活TRAIL通路抗癌機(jī)制的研究
    3.1 引言
    3.2 實驗材料與設(shè)備
        3.2.1 實驗材料
            3.2.1.1 所用細(xì)胞系
            3.2.1.2 主要實驗試劑
        3.2.2 主要實驗儀器及設(shè)備
        3.2.3 試劑配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 化合物庫3 的來源
        3.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            3.3.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            3.3.2.2 細(xì)胞傳代
            3.3.2.3 細(xì)胞凍存
            3.3.2.4 Pulp細(xì)胞的原代培養(yǎng)
        3.3.3 MTT實驗
        3.3.4 化合物3u抗癌作用生效時間的檢測
        3.3.5 克隆形成實驗
        3.3.6 蛋白樣品的制備
            3.3.6.1 細(xì)胞總蛋白的提取
            3.3.6.2 細(xì)胞線粒體蛋白的提取
            3.3.6.3 細(xì)胞膜蛋白的提取
            3.3.6.4 BCA法測定蛋白濃度
        3.3.7 蛋白質(zhì)免疫印跡western blot
            3.3.7.1 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳
            3.3.7.2 轉(zhuǎn)膜
            3.3.7.3 免疫學(xué)檢測
        3.3.8 實時熒光定量PCR(qPCR)
            3.3.8.1 細(xì)胞總RNA的提取
            3.3.8.2 cDNA第一鏈合成
            3.3.8.3 實時熒光定量PCR
            3.3.8.4 數(shù)據(jù)處理
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 化合物庫3 的化學(xué)結(jié)構(gòu)與物理性質(zhì)
        3.4.2 化合物庫3 抗癌活性初篩結(jié)果
        3.4.3 三種候選化合物的復(fù)篩結(jié)果
        3.4.4 3u處理A375 克隆形成的結(jié)果
        3.4.5 3u誘導(dǎo)細(xì)胞死亡時間和濃度的探索
        3.4.6 3u抗癌作用與內(nèi)源性凋亡途徑的關(guān)系
        3.4.7 較高濃度3u可能的抗癌機(jī)制
        3.4.8 外源性凋亡信號的來源
        3.4.9 3u上調(diào)TNFRSF和 FADD表達(dá)的機(jī)制
        3.4.10 較低濃度3u可能的抗癌機(jī)制
        3.4.11 使用抑制劑再驗證3u的抗癌機(jī)制
    3.5 討論
第四章 三藥聯(lián)用提高癌細(xì)胞對TRAIL敏感性的研究
    4.1 引言
    4.2 實驗材料與設(shè)備
        4.2.1 實驗材料
            4.2.1.1 所用的質(zhì)粒
            4.2.1.2 主要實驗試劑
    4.3 實驗方法
        4.3.1 敲低c-FLIP質(zhì)粒的制備及轉(zhuǎn)染
        4.3.2 caspase-3 活性測定
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 抑制劑作用條件的優(yōu)化
        4.4.2 三藥聯(lián)用誘導(dǎo)U2OS細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制
        4.4.3 三藥聯(lián)用對多種癌細(xì)胞系的抗癌效果
        4.4.4 三藥聯(lián)用在正常細(xì)胞中的效果
        4.4.5 三藥聯(lián)用不敏感的癌細(xì)胞逃逸凋亡
        4.4.6 癌細(xì)胞凋亡敏感性的恢復(fù)
    4.5 討論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點
    5.3 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附表
附錄



本文編號：3837733