目的:宮頸癌是一種惡性疾病,對全世界婦女的健康是一個巨大的威脅。手術(shù)切除及同步放化療是治療宮頸癌的主要策略。部分晚期腫瘤患者無法從傳統(tǒng)治療中獲益,導(dǎo)致臨床療效欠佳。ALOX12B是一個編碼脂氧合酶的基因,在肺癌和乳腺癌中檢測到ALOX12B突變。此外,ALOX12B對表皮樣癌細胞的增殖具有促進作用。然而,其在宮頸癌中的作用目前未見報道,因此有必要研究ALOX12B在宮頸癌中的作用及相關(guān)機制。方法:為研究ALOX12B在宮頸癌進展中的功能,通過慢病毒載體降低宮頸癌細胞系Ca-Ski和C33A中ALOX12B的表達,并通過q-PCR檢測病毒對ALOX12B的敲低效率。設(shè)計CCK-8和克隆形成實驗驗證ALOX12B敲低后對宮頸癌細胞增殖和克隆形成能力的影響。PI實驗檢測ALOX12B敲低后對宮頸癌細胞周期的影響。Transwell和劃痕愈合實驗檢測ALOX12B對腫瘤細胞的遷移和侵襲的影響。此外,設(shè)計異種移植瘤模型驗證ALOX12B在體內(nèi)對宮頸癌進展的影響。為進一步闡明ALOX12B在宮頸癌發(fā)展中的作用機制,通過文獻調(diào)研以及數(shù)據(jù)庫分析預(yù)測ALOX12B的靶點。Western blot檢測AL...

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞
第一章 引言
    1.1 宮頸癌
    1.2 宮頸癌的分子機制
        1.2.1 HPV與宮頸癌
        1.2.2 HPV陰性宮頸癌
    1.3 宮頸癌增殖、侵襲和遷移
        1.3.1 宮頸癌增殖與細胞周期
        1.3.2 宮頸癌遷移、侵襲和EMT
    1.4 ALOX12B
        1.4.1 ALOX12B的生物學(xué)功能
        1.4.2 ALOX12B與腫瘤
    1.5 實驗設(shè)計和研究意義
第二章 ALOX12B加速宮頸癌細胞的增殖并促進腫瘤的生長
    2.1 引言
    2.2 實驗儀器
    2.3 實驗材料
        2.3.1 實驗試劑
        2.3.2 實驗抗體
    2.4 溶液配制
        2.4.1 細胞培養(yǎng)液的配制
        2.4.2 細胞裂解液
        2.4.3 配制蛋白電泳溶液
    2.5 實驗方法
        2.5.1 細胞培養(yǎng)
        2.5.2 慢病毒轉(zhuǎn)染
        2.5.3 實時熒光定量PCR(q-PCR)
        2.5.4 細胞增殖實驗
        2.5.5 克隆形成實驗
        2.5.6 劃痕愈合實驗
        2.5.7 PI染色實驗(檢測細胞周期)
        2.5.8 蛋白免疫印跡染色(Western Blot)
        2.5.9 Transwell遷移侵襲實驗
        2.5.10 荷瘤小鼠模型
        2.5.11 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.5.12 統(tǒng)計分析
    2.6 實驗結(jié)果
        2.6.1 靶向ALOX12B的shRNA慢病毒載體的構(gòu)建和驗證
        2.6.2 ALOX12B在宮頸癌細胞C33A中有效表達
        2.6.3 ALOX12B基因敲低抑制宮頸癌細胞增殖和克隆形成
        2.6.4 體外ALOX12B對宮頸癌細胞遷移和侵襲不是必需的
        2.6.5 ALOX12B基因敲低抑制宮頸癌細胞周期轉(zhuǎn)換
        2.6.6 ALOX12B基因敲低對抑制異種移植小鼠腫瘤生長
        2.6.7 ALOX12B調(diào)控宮頸癌PI3K/ERK1 信號通路
    2.7 討論
第三章 ALOX12B調(diào)控宮頸癌PTGS2及EMT的機制研究
    3.1 引言
    3.2 實驗儀器
    3.3 實驗材料
        3.3.1 實驗試劑
        3.3.2 實驗抗體
    3.4 溶液配制
        3.4.1 細胞培養(yǎng)液的配制
        3.4.2 細胞裂解液
        3.4.3 配制蛋白電泳溶液
    3.5 實驗方法
        3.5.1 細胞培養(yǎng)
        3.5.2 慢病毒轉(zhuǎn)染
        3.5.3 細胞增殖實驗
        3.5.4 蛋白免疫印跡染色(Western Blot)
        3.5.5 統(tǒng)計分析
    3.6 實驗結(jié)果
        3.6.1 ALOX12B調(diào)控宮頸癌中PTGS2表達
        3.6.2 ALOX12B通過PTGS2調(diào)控宮頸癌發(fā)展
        3.6.3 體內(nèi)抑制ALOX12B抑制宮頸癌EMT相關(guān)信號通路
    3.7 討論
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：3798583