目的：急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是一種導致危重癥患者高病死率和致殘率的急性呼吸衰竭。雖經(jīng)大量基礎和臨床研究,ARDS的發(fā)病機制仍不明了,但無疑免疫炎癥細胞及其相關炎性介質影響著ARDS的進展及其預后。中性粒細胞(PMN)在肺部積聚、凋亡延遲以及凋亡后未被及時清除而引起的瀑式炎癥反應,被認為是引發(fā)ARDS的重要機制。但近年來,淋巴細胞,特別是CD46T細胞在ARDS發(fā)病中的作用尤為引人關注。新近發(fā)現(xiàn)的促炎性CD4+T細胞亞群,Th17細胞和抑炎性的Treg細胞間的平衡在眾多免疫炎癥性疾患中發(fā)揮著重要作用。而活化的PMN分泌大量炎癥因子,是調節(jié)Th17、Treg細胞分化的潛在新來源,反過來Th17、Treg細胞又可以影響PMN在炎癥部位的積聚、凋亡及其功能改變。本研究首先觀測Th17、Treg細胞及其相關因子的變化,探討Th17/Treg失衡與ARDS患者肺損傷程度及臨床結局的關聯(lián),明確Th17/Treg失衡在ARDS發(fā)病中的臨床意義；然后通過體外細胞實驗觀察PMN對Th17/Treg平衡的影響,以及Th17、Treg細胞對PMN趨化、凋亡等功能的改變,探討PMN和Th17/Treg平...

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 急性呼吸窘迫綜合征概述
    1.2 ARDS與免疫炎癥反應
    1.3 中性粒細胞與ARDS
    1.4 中性粒細胞與Treg細胞
    1.5 中性粒細胞與Th17細胞
    1.6 ARDS與Th17/Treg平衡
    1.7 本研究的目的、內容和技術路線
        1.7.1 研究目的
        1.7.2 研究內容
        1.7.3 技術路線
第二章 ARDS患者外周血Th17/Treg細胞失衡及其臨床意義
    2.1 材料與方法
        2.1.1 研究對象和方案
        2.1.2 主要抗體和試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 數(shù)據(jù)收集和結局定義
        2.1.5 外周血標本收集和檢測
        2.1.6 ELISA檢測外周血細胞因子
        2.1.7 人外周血單個核細胞(PBMC)分離
        2.1.8 流式檢測外周血Th17、Treg細胞
        2.1.9 統(tǒng)計學分析
    2.2 結果
        2.2.1 ARDS患者臨床特征以及結局
        2.2.2 ARDS患者外周血炎癥指標、Th17、Treg細胞及其相關細胞因子的變化
        2.2.3 ARDS患者外周血Th17/Treg比值與疾病嚴重程度和臨床結局的相關性
        2.2.4 ARDS患者28d病死率的預測因素
    2.3 討論
    2.4 本研究的局限性
    2.5 結論
第三章 ARDS患者中性粒細胞對Th17/Treg細胞平衡的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 研究對象和方案
        3.1.2 主要研究抗體和試劑
        3.1.3 主要研究儀器
        3.1.4 外周血標本收集和檢測
        3.1.5 ELISA檢測外周血、培養(yǎng)細胞上清液中以及PMN細胞內的細胞因子
        3.1.6 人外周血單個核細胞(PBMCs)分離
        3.1.7 免疫磁珠(MACS)法分離CD4⁺T細胞
        3.1.8 免疫磁珠(MACS)法分離Th17細胞
        3.1.9 免疫磁珠(MACS)法分離PMN細胞
        3.1.10 體外細胞培養(yǎng)實驗
        3.1.11 流式細胞儀檢測免疫磁珠法分離所得細胞的純度
        3.1.12 流式檢測Th17細胞表面CCR2、CCR6受體的表達
        3.1.13 流式檢測PMN細胞表面MHCⅡ、共刺激分子CD80/CD86的表達
        3.1.14 流式檢測體外細胞培養(yǎng)體系中Th17、Treg細胞的表達
        3.1.15 Western Blot檢測PMN細胞表達MHCⅡ類分子
        3.1.16 RT-PCR法檢驗Foxp3 mRNA、RoR-mRNA的表達
        3.1.17 體外細胞趨化實驗
        3.1.18 統(tǒng)計學分析
    3.2 結果
        3.2.1 ARDS患者外周血PMN與Th17細胞和Treg細胞的相關性
        3.2.2 免疫磁珠法獲取外周血初始CD4⁺T細胞、PMN及Th17細胞
        3.2.3 外周血PMN對初始CD4⁺T細胞極化方向的影響
        3.2.4 PMN促進Th17細胞分化的機制
        3.2.5 PMN對Th17細胞趨化的影響
    3.3 討論
    3.4 結論
第四章 ARDS患者Th17、Treg細胞對中性粒細胞趨化、活性及凋亡的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 研究對象和方案
        4.1.2 主要研究抗體和試劑
        4.1.3 主要研究儀器
        4.1.4 外周血標本收集和檢測
        4.1.5 ELISA法檢測Th17、Treg細胞內的細胞因子
        4.1.6 人外周血單個核細胞(PBMCs)分離
        4.1.7 免疫磁珠(MACS)法分離、純化Th17細胞
        4.1.8 免疫磁珠(MACS)法分離、純化PMN細胞
        4.1.9 免疫磁珠(MACS)法分離、純化Treg細胞
        4.1.10 體外細胞培養(yǎng)實驗
        4.1.11 流式細胞儀檢測免疫磁珠法分離所得細胞的純度
        4.1.12 流式細胞儀檢測PMN細胞表面CD11b的表達
        4.1.13 流式細胞儀檢測PMN細胞的凋亡
        4.1.14 體外細胞趨化實驗
        4.1.15 統(tǒng)計學分析
    4.2 結果
        4.2.1 免疫磁珠法獲取外周血PMN、Th17和Treg細胞
        4.2.2 Th17、Treg細胞對PMN趨化的影響
        4.2.3 Th17、Treg細胞對PMN活性的影響
        4.2.4 Th17、Treg細胞對PMN凋亡的影響
    4.3 討論
    4.4 結論
第五章 主要結論、學術創(chuàng)新與下一步研究設想
    5.1 主要結論
    5.2 創(chuàng)新性
    5.3 下一步研究設想
參考文獻
致謝
攻讀博士學位期間發(fā)表的論文及其他科研成果



本文編號：3797859