目的：急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是一種導(dǎo)致危重癥患者高病死率和致殘率的急性呼吸衰竭。雖經(jīng)大量基礎(chǔ)和臨床研究,ARDS的發(fā)病機(jī)制仍不明了,但無疑免疫炎癥細(xì)胞及其相關(guān)炎性介質(zhì)影響著ARDS的進(jìn)展及其預(yù)后。中性粒細(xì)胞(PMN)在肺部積聚、凋亡延遲以及凋亡后未被及時清除而引起的瀑式炎癥反應(yīng),被認(rèn)為是引發(fā)ARDS的重要機(jī)制。但近年來,淋巴細(xì)胞,特別是CD46T細(xì)胞在ARDS發(fā)病中的作用尤為引人關(guān)注。新近發(fā)現(xiàn)的促炎性CD4+T細(xì)胞亞群,Th17細(xì)胞和抑炎性的Treg細(xì)胞間的平衡在眾多免疫炎癥性疾患中發(fā)揮著重要作用。而活化的PMN分泌大量炎癥因子,是調(diào)節(jié)Th17、Treg細(xì)胞分化的潛在新來源,反過來Th17、Treg細(xì)胞又可以影響PMN在炎癥部位的積聚、凋亡及其功能改變。本研究首先觀測Th17、Treg細(xì)胞及其相關(guān)因子的變化,探討Th17/Treg失衡與ARDS患者肺損傷程度及臨床結(jié)局的關(guān)聯(lián),明確Th17/Treg失衡在ARDS發(fā)病中的臨床意義；然后通過體外細(xì)胞實驗觀察PMN對Th17/Treg平衡的影響,以及Th17、Treg細(xì)胞對PMN趨化、凋亡等功能的改變,探討PMN和Th17/Treg平...

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 急性呼吸窘迫綜合征概述
    1.2 ARDS與免疫炎癥反應(yīng)
    1.3 中性粒細(xì)胞與ARDS
    1.4 中性粒細(xì)胞與Treg細(xì)胞
    1.5 中性粒細(xì)胞與Th17細(xì)胞
    1.6 ARDS與Th17/Treg平衡
    1.7 本研究的目的、內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.7.1 研究目的
        1.7.2 研究內(nèi)容
        1.7.3 技術(shù)路線
第二章 ARDS患者外周血Th17/Treg細(xì)胞失衡及其臨床意義
    2.1 材料與方法
        2.1.1 研究對象和方案
        2.1.2 主要抗體和試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 數(shù)據(jù)收集和結(jié)局定義
        2.1.5 外周血標(biāo)本收集和檢測
        2.1.6 ELISA檢測外周血細(xì)胞因子
        2.1.7 人外周血單個核細(xì)胞(PBMC)分離
        2.1.8 流式檢測外周血Th17、Treg細(xì)胞
        2.1.9 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 ARDS患者臨床特征以及結(jié)局
        2.2.2 ARDS患者外周血炎癥指標(biāo)、Th17、Treg細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子的變化
        2.2.3 ARDS患者外周血Th17/Treg比值與疾病嚴(yán)重程度和臨床結(jié)局的相關(guān)性
        2.2.4 ARDS患者28d病死率的預(yù)測因素
    2.3 討論
    2.4 本研究的局限性
    2.5 結(jié)論
第三章 ARDS患者中性粒細(xì)胞對Th17/Treg細(xì)胞平衡的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 研究對象和方案
        3.1.2 主要研究抗體和試劑
        3.1.3 主要研究儀器
        3.1.4 外周血標(biāo)本收集和檢測
        3.1.5 ELISA檢測外周血、培養(yǎng)細(xì)胞上清液中以及PMN細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子
        3.1.6 人外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)分離
        3.1.7 免疫磁珠(MACS)法分離CD4⁺T細(xì)胞
        3.1.8 免疫磁珠(MACS)法分離Th17細(xì)胞
        3.1.9 免疫磁珠(MACS)法分離PMN細(xì)胞
        3.1.10 體外細(xì)胞培養(yǎng)實驗
        3.1.11 流式細(xì)胞儀檢測免疫磁珠法分離所得細(xì)胞的純度
        3.1.12 流式檢測Th17細(xì)胞表面CCR2、CCR6受體的表達(dá)
        3.1.13 流式檢測PMN細(xì)胞表面MHCⅡ、共刺激分子CD80/CD86的表達(dá)
        3.1.14 流式檢測體外細(xì)胞培養(yǎng)體系中Th17、Treg細(xì)胞的表達(dá)
        3.1.15 Western Blot檢測PMN細(xì)胞表達(dá)MHCⅡ類分子
        3.1.16 RT-PCR法檢驗Foxp3 mRNA、RoR-mRNA的表達(dá)
        3.1.17 體外細(xì)胞趨化實驗
        3.1.18 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 ARDS患者外周血PMN與Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的相關(guān)性
        3.2.2 免疫磁珠法獲取外周血初始CD4⁺T細(xì)胞、PMN及Th17細(xì)胞
        3.2.3 外周血PMN對初始CD4⁺T細(xì)胞極化方向的影響
        3.2.4 PMN促進(jìn)Th17細(xì)胞分化的機(jī)制
        3.2.5 PMN對Th17細(xì)胞趨化的影響
    3.3 討論
    3.4 結(jié)論
第四章 ARDS患者Th17、Treg細(xì)胞對中性粒細(xì)胞趨化、活性及凋亡的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 研究對象和方案
        4.1.2 主要研究抗體和試劑
        4.1.3 主要研究儀器
        4.1.4 外周血標(biāo)本收集和檢測
        4.1.5 ELISA法檢測Th17、Treg細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子
        4.1.6 人外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)分離
        4.1.7 免疫磁珠(MACS)法分離、純化Th17細(xì)胞
        4.1.8 免疫磁珠(MACS)法分離、純化PMN細(xì)胞
        4.1.9 免疫磁珠(MACS)法分離、純化Treg細(xì)胞
        4.1.10 體外細(xì)胞培養(yǎng)實驗
        4.1.11 流式細(xì)胞儀檢測免疫磁珠法分離所得細(xì)胞的純度
        4.1.12 流式細(xì)胞儀檢測PMN細(xì)胞表面CD11b的表達(dá)
        4.1.13 流式細(xì)胞儀檢測PMN細(xì)胞的凋亡
        4.1.14 體外細(xì)胞趨化實驗
        4.1.15 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 免疫磁珠法獲取外周血PMN、Th17和Treg細(xì)胞
        4.2.2 Th17、Treg細(xì)胞對PMN趨化的影響
        4.2.3 Th17、Treg細(xì)胞對PMN活性的影響
        4.2.4 Th17、Treg細(xì)胞對PMN凋亡的影響
    4.3 討論
    4.4 結(jié)論
第五章 主要結(jié)論、學(xué)術(shù)創(chuàng)新與下一步研究設(shè)想
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新性
    5.3 下一步研究設(shè)想
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文及其他科研成果



本文編號：3797859