研究背景:肝細(xì)胞肝癌是目前世界上最高發(fā)最常見的癌癥之一。在我國(guó),目前肝細(xì)胞肝癌的發(fā)病率位居第二位,僅次于第一位的肺癌。目前,肝細(xì)胞肝癌的治療手段仍以手術(shù)切除腫瘤為主,生存率在五年之內(nèi)依然較低。限制肝細(xì)胞肝癌外科手術(shù)治療療效的關(guān)鍵點(diǎn)在于早期因無癥狀而導(dǎo)致診斷率較低和外科術(shù)后再次復(fù)發(fā)概率較高,而外科手術(shù)以外卻缺少效果明確的臨床輔助治療,因此深入開展對(duì)肝癌發(fā)生、增殖、侵襲中的腫瘤分子機(jī)制研究、開發(fā)新的治療靶點(diǎn)以及新型的臨床診療腫瘤標(biāo)記物將成為當(dāng)今腫瘤機(jī)制研究的熱點(diǎn)問題。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNA)與編碼基因相比,缺少顯著的開放性閱讀框架,更少的外顯子,更低的表達(dá)水平的非編碼RNA,且核苷酸總數(shù)大于200個(gè)。很長(zhǎng)一段時(shí)間以來,大部分有關(guān)基因的研究都把目光集中在蛋白編碼基因上,人們都遵循著DNA-mRNA-蛋白質(zhì)這一中心法則,而非編碼基因曾經(jīng)被研究者誤定義為是基因組中的“暗物質(zhì)”或者“噪音”。最近幾年,大量實(shí)驗(yàn)證明,一些基因組中的“噪音”轉(zhuǎn)錄而來的長(zhǎng)鏈非編碼RNA在轉(zhuǎn)錄水平、表觀遺傳水平、蛋白修飾過程、翻譯水平中都可以發(fā)揮非常重要的調(diào)節(jié)作用。反義LncRNA,顧名思義是一類從編碼基因的反義鏈...

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 :肝癌中Lnc CADM1-AS1 異常表達(dá)及臨床意義
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 組織標(biāo)本
            2.1.2 細(xì)胞株
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞系和培養(yǎng)
            2.2.2 組織芯片
            2.2.3 原位雜交
            2.2.4 細(xì)胞RNA的提取
            2.2.5 cDNA的合成
            2.2.6 qPCR檢測(cè)IncRNA相對(duì)表達(dá)量
        2.3 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
    4 討論
    5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第二部分 :CADM1-AS1對(duì)HCC增殖、遷移、侵襲、細(xì)胞周期的影響及相關(guān)機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 主要儀器設(shè)備
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 構(gòu)建穩(wěn)定干擾CADM1-AS1 表達(dá)的肝癌細(xì)胞系
            2.2.2 構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)CADM1-AS1 的肝癌細(xì)胞系
            2.2.3 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)CCK-8 測(cè)定
            2.2.4 EdU檢測(cè)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
            2.2.5 克隆形成實(shí)驗(yàn)
            2.2.6 傷口愈合實(shí)驗(yàn)
            2.2.7 Transwell小室實(shí)驗(yàn)
            2.2.8 細(xì)胞周期測(cè)定
            2.2.9 裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)
            2.2.10 蛋白質(zhì)印跡
            2.2.11 免疫組化檢測(cè)腫瘤細(xì)胞周期蛋白變化;
        2.3 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 構(gòu)建CADM1-AS1 過表達(dá)和低表達(dá)HCC細(xì)胞系
        3.2 CADM1-AS1 表達(dá)對(duì)HepG2和BEL-7402 細(xì)胞增殖的影響
        3.3 CADM1-AS1對(duì)HepG2和BEL-7402 細(xì)胞遷移和侵襲的影響
        3.4 CADM1-AS1 表達(dá)對(duì)HepG2和BEL-7402 細(xì)胞周期分布的影響
        3.5 CADM1-AS1 對(duì)裸鼠體內(nèi)腫瘤作用
        3.6 CADM1-AS1 調(diào)節(jié)PTEN/AKT/GSK-3β信號(hào)通路
        3.7 CADM1-AS1 表達(dá)對(duì)HepG2和BEL-7402 細(xì)胞周期蛋白的影響
        3.8 CADM1-AS1 對(duì)裸鼠體內(nèi)腫瘤PTEN/AKT/GSK-3β及細(xì)胞周期蛋白的影響
    4 討論
        4.1 上調(diào)及下調(diào)CADM1-AS1 肝癌細(xì)胞株的構(gòu)建
        4.2 LncRNA CADM1-AS1 與腫瘤增殖、遷移、侵襲以及細(xì)胞周期的關(guān)系
    5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3790721