發(fā)布時間：2023-04-14 18:22

　　研究背景:肝細胞肝癌是目前世界上最高發(fā)最常見的癌癥之一。在我國,目前肝細胞肝癌的發(fā)病率位居第二位,僅次于第一位的肺癌。目前,肝細胞肝癌的治療手段仍以手術(shù)切除腫瘤為主,生存率在五年之內(nèi)依然較低。限制肝細胞肝癌外科手術(shù)治療療效的關(guān)鍵點在于早期因無癥狀而導致診斷率較低和外科術(shù)后再次復發(fā)概率較高,而外科手術(shù)以外卻缺少效果明確的臨床輔助治療,因此深入開展對肝癌發(fā)生、增殖、侵襲中的腫瘤分子機制研究、開發(fā)新的治療靶點以及新型的臨床診療腫瘤標記物將成為當今腫瘤機制研究的熱點問題。長鏈非編碼RNA(LncRNA)與編碼基因相比,缺少顯著的開放性閱讀框架,更少的外顯子,更低的表達水平的非編碼RNA,且核苷酸總數(shù)大于200個。很長一段時間以來,大部分有關(guān)基因的研究都把目光集中在蛋白編碼基因上,人們都遵循著DNA-mRNA-蛋白質(zhì)這一中心法則,而非編碼基因曾經(jīng)被研究者誤定義為是基因組中的“暗物質(zhì)”或者“噪音”。最近幾年,大量實驗證明,一些基因組中的“噪音”轉(zhuǎn)錄而來的長鏈非編碼RNA在轉(zhuǎn)錄水平、表觀遺傳水平、蛋白修飾過程、翻譯水平中都可以發(fā)揮非常重要的調(diào)節(jié)作用。反義LncRNA,顧名思義是一類從編碼基因的反義鏈...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
前言
    參考文獻
第一部分 :肝癌中Lnc CADM1-AS1 異常表達及臨床意義
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 組織標本
            2.1.2 細胞株
            2.1.3 實驗試劑
            2.1.4 實驗儀器和設備
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞系和培養(yǎng)
            2.2.2 組織芯片
            2.2.3 原位雜交
            2.2.4 細胞RNA的提取
            2.2.5 cDNA的合成
            2.2.6 qPCR檢測IncRNA相對表達量
        2.3 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
    4 討論
    5 小結(jié)
    參考文獻
第二部分 :CADM1-AS1對HCC增殖、遷移、侵襲、細胞周期的影響及相關(guān)機制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 主要儀器設備
        2.2 實驗方法
            2.2.1 構(gòu)建穩(wěn)定干擾CADM1-AS1 表達的肝癌細胞系
            2.2.2 構(gòu)建穩(wěn)定過表達CADM1-AS1 的肝癌細胞系
            2.2.3 細胞增殖實驗CCK-8 測定
            2.2.4 EdU檢測細胞增殖實驗
            2.2.5 克隆形成實驗
            2.2.6 傷口愈合實驗
            2.2.7 Transwell小室實驗
            2.2.8 細胞周期測定
            2.2.9 裸鼠皮下成瘤實驗
            2.2.10 蛋白質(zhì)印跡
            2.2.11 免疫組化檢測腫瘤細胞周期蛋白變化;
        2.3 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 構(gòu)建CADM1-AS1 過表達和低表達HCC細胞系
        3.2 CADM1-AS1 表達對HepG2和BEL-7402 細胞增殖的影響
        3.3 CADM1-AS1對HepG2和BEL-7402 細胞遷移和侵襲的影響
        3.4 CADM1-AS1 表達對HepG2和BEL-7402 細胞周期分布的影響
        3.5 CADM1-AS1 對裸鼠體內(nèi)腫瘤作用
        3.6 CADM1-AS1 調(diào)節(jié)PTEN/AKT/GSK-3β信號通路
        3.7 CADM1-AS1 表達對HepG2和BEL-7402 細胞周期蛋白的影響
        3.8 CADM1-AS1 對裸鼠體內(nèi)腫瘤PTEN/AKT/GSK-3β及細胞周期蛋白的影響
    4 討論
        4.1 上調(diào)及下調(diào)CADM1-AS1 肝癌細胞株的構(gòu)建
        4.2 LncRNA CADM1-AS1 與腫瘤增殖、遷移、侵襲以及細胞周期的關(guān)系
    5 小結(jié)
    參考文獻
本研究創(chuàng)新性的自我評價
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝



本文編號：3790721