研究背景與研究目的:敗血癥,又稱膿毒癥,是一種嚴(yán)重的可能危及生命的全身性炎癥反應(yīng),其致病原因主要由感染或者組織損傷引起的全身性炎癥應(yīng)答綜合征,可導(dǎo)致多器官組織損傷,甚至可因器官衰竭而導(dǎo)致死亡。敗血癥目前仍然是醫(yī)院重癥監(jiān)護(hù)病房中最常見的死亡原因,敗血癥的預(yù)防與治療依然是當(dāng)前社會(huì)的巨大公共衛(wèi)生負(fù)擔(dān)。高遷移率(HMG-Box)蛋白家族是一類細(xì)胞核蛋白,具有獨(dú)特的DNA結(jié)合域HMG-Box,與非B型DNA結(jié)構(gòu)的親和力高,通過彎曲,扭結(jié)和展開來扭曲DNA,具有維持染色質(zhì)結(jié)構(gòu),DNA修復(fù),轉(zhuǎn)錄調(diào)控,或者促進(jìn)核糖體的生物合成等作用。然而,1999年研究者意外的發(fā)現(xiàn)HMGB1在全身性炎癥反應(yīng)中可以從細(xì)胞核中分泌到細(xì)胞外,并作為一種促炎細(xì)胞因子介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。在敗血癥期間,阻止HMGB1的分泌或者用HMGB1特異性抗體靶向血液中HMGB1,可以顯著提高致死性敗血癥的生存率�，F(xiàn)有文獻(xiàn)表明,高遷移率蛋白家族中的多個(gè)成員參與多種因素介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。HMGXB4是我們首次在哺乳動(dòng)物中克隆的該家族的新成員,其是否參與炎癥反應(yīng)尚不清楚。本文旨在探討Hmgxb4基因在全身性炎癥誘導(dǎo)的敗血癥中的作用及其分子機(jī)制,從而為尋...

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮寫一覽表
第1章 引言
第2章 LPS刺激對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞HMGXB4 表達(dá)的影響
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)小鼠
        2.1.2 試劑耗材
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的分離
        2.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.3 Western blot免疫印跡檢測(cè)
        2.2.4 巨噬細(xì)胞的免疫熒光
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 LPS刺激可誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞HMGXB4 的表達(dá)
        2.4.2 證實(shí)HMGXB4是一細(xì)胞核蛋白
    2.5 討論
        2.5.1 LPS刺激引起的先天性固有免疫應(yīng)答反應(yīng)
        2.5.2 HMGB1蛋白與先天性固有免疫應(yīng)答
第3章 Hmgxb4基因敲除小鼠的構(gòu)建及其特征
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.1.1 Hmgxb4基因缺失小鼠的構(gòu)建
        3.1.2 試劑耗材
        3.1.3 試劑配制
        3.1.4 主要儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 小鼠基因型鑒定
        3.2.2 小鼠體重監(jiān)測(cè)
    3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 Hmgxb4^neo/neo敲除小鼠的鑒定及特征
        3.4.2 Hmgxb4-CMV-Cre敲除小鼠的鑒定及特征
    3.5 討論
        3.5.1 HMGBs蛋白家族基因缺失的表型
第4章 Hmgxb4 基因缺失改善LPS誘導(dǎo)的敗血癥死亡率和組織損傷
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)小鼠
        4.1.2 試劑耗材
        4.1.3 試劑配制
        4.1.4 主要儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 小鼠敗血癥模型制備及生存曲線
            4.2.1.1 內(nèi)毒素(LPS)誘導(dǎo)小鼠敗血癥模型的制備
            4.2.1.2 多微生物(CLP)誘導(dǎo)小鼠敗血癥模型的制備
        4.2.2 全身性炎癥反應(yīng)綜合癥(SIRS)的誘導(dǎo)
        4.2.3 血清炎癥因子的ELISA分析
        4.2.4 組織包埋切片
        4.2.5 蘇木素-伊紅(HE)染色
        4.2.6 TUNEL染色檢測(cè)肺組織細(xì)胞凋亡
        4.2.7 LGALS3(Mac2)免疫熒光鑒定肺組織巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)
        4.2.8 肺組織通透性檢測(cè)
    4.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 Hmgxb4基因缺失延緩全身性炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)的小鼠敗血癥死亡率
        4.4.2 Hmgxb4 基因缺失減輕LPS誘導(dǎo)的多器官損傷
        4.4.3 Hmgxb4 基因缺失改善LPS誘導(dǎo)的肺組織細(xì)胞凋亡,免疫細(xì)胞浸潤(rùn)與肺血管通透性
        4.4.4 Hmgxb4基因缺失對(duì)經(jīng)典的促炎細(xì)胞因子沒有影響
    4.5 討論
        4.5.1 全身性炎癥反應(yīng)綜合癥(SIRS)
        4.5.2 血管內(nèi)皮系統(tǒng)紊亂與多器官損傷
第5章 Hmgxb4 基因缺失通過抑制NOS2 的表達(dá)減少NO的產(chǎn)生改善LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)小鼠
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        5.1.3 試劑與耗材
        5.1.4 試劑配制
        5.1.5 主要儀器設(shè)備
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 RNA測(cè)序
        5.2.2 qRT-PCR
        5.2.3 Western blot
        5.2.4 NO測(cè)定
        5.2.5 10T1/2細(xì)胞的培養(yǎng)
        5.2.6 NOS2 enhancer雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒構(gòu)建
        5.2.7 NOS2 enhancer雙熒光素酶報(bào)告截短質(zhì)粒構(gòu)建
        5.2.8 NOS2 enhancer雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒的活性檢測(cè)
        5.2.9 肺組織通透性的檢測(cè)
    5.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.4.1 HMGXB4 缺失顯著改變LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞基因表達(dá)譜
        5.4.2 Nos2 基因是HMGXB4 調(diào)控的潛在靶基因
        5.4.3 HMGXB4 過表達(dá)促進(jìn)LPS介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞NOS2 表達(dá)和NO產(chǎn)生
        5.4.4 HMGXB4 反式激活Nos2 基因
        5.4.5 HMGXB4 缺失明顯減輕LPS誘導(dǎo)的肺組織損傷和NOS2 表達(dá)
    5.5 討論
        5.5.1 一氧化氮合成酶
        5.5.2 誘導(dǎo)型NOS(NOS2)產(chǎn)生的NO和血管內(nèi)皮系統(tǒng)紊亂
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 工作總結(jié)示意圖
    6.3 進(jìn)一步工作的方向
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3790534