結直腸癌(Colorectal cancer,CRC)是一類常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,嚴重威脅人類健康。傳統(tǒng)的放化療并不能顯著提高患者的生存率,因而探索一種新型有效的結直腸癌治療手段至關重要,近些年溶瘤病毒的腫瘤治療應運而生。溶瘤病毒可選擇性地在腫瘤細胞中復制并裂解腫瘤細胞,同時激活機體的抗腫瘤免疫反應;然而,直接通過靜脈注射溶瘤病毒會引起抗病毒免疫反應而降低其作用效果,因而選擇合適的載體將溶瘤病毒運輸至腫瘤部位是實現(xiàn)安全、高效、精準治療的關鍵。本研究我們利用人經(jīng)血干細胞(Human menstrual blood-derived stem cells,Men SCs)運輸溶瘤腺病毒,探索其作為載體的靶向運輸能力和結合溶瘤腺病毒對CRC的治療效果。MenSCs是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種成體干細胞,與其他間充質(zhì)干細胞相比,具有來源豐富、采集方便無創(chuàng)、體外擴增迅速、無倫理道德爭議等優(yōu)勢。本研究中,我們首先從女性志愿者經(jīng)血樣本中分離獲取經(jīng)血源干細胞,并對其進行傳代培養(yǎng)和相關表面標記的鑒定,進而探索其作為病毒運輸載體的可行性和結合溶瘤病毒治療CRC的有效性。為了優(yōu)化溶瘤病毒對Men SCs的感染效率,...

【文章頁數(shù)】：141 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
前言
第一部分 經(jīng)血干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定
    1.1 前言
    1.2 材料和試劑
        1.2.1 MenSCs的來源
        1.2.2 主要試劑
        1.2.3 主要設備
    1.3 實驗方法
        1.3.1 MenSCs的分離培養(yǎng)
        1.3.2 細胞凍存和復蘇
        1.3.3 MenSCs細胞表面標記分子鑒定
        1.3.4 MenSCs誘導分化實驗
        1.3.5 免疫熒光檢測MenSCs表面干性分子
    1.4 實驗結果
        1.4.1 MenSCs的分離培養(yǎng)
        1.4.2 MenSCs細胞成骨成脂分化結果
        1.4.3 MenSCs細胞表面標記分子流式鑒定結果
        1.4.4 MenSCs表面干性標記的表達
    1.5 討論
    1.6 結論
第二部分 MenSCs-CRAd5/F11 細胞株的構建及功能鑒定
    2.1 前言
    2.2 材料與試劑
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要設備
        2.2.3 MenSCs及腫瘤細胞系來源
        2.2.4 結直腸癌細胞的培養(yǎng)
        2.2.5 溶瘤腺病毒CRAd5/F11的構建及分離純化
        2.2.6 動物實驗
    2.3 實驗方法
        2.3.1 Western Blot檢測MenSCs表面受體蛋白表達
        2.3.2 CRAd5/F11 感染MenSCs
        2.3.3 電鏡的檢測CRAd5/F11
        2.3.4 CRAd5/F11對MenSCs毒性作用的檢測
        2.3.5 CRAd5/F11 感染后MenSCs上清中病毒顆粒數(shù)的檢測
        2.3.6 MenSCs-CRAd5/F11 細胞表面標記分子鑒定
        2.3.7 MenSCs-CRAd5/F11 對腫瘤細胞的趨化實驗
        2.3.8 MenSCs-CRAd5/F11 在腫瘤小鼠體內(nèi)的遷移實驗
        2.3.9 統(tǒng)計學分析
    2.4 實驗結果
        2.4.1 MenSCs表面受體蛋白的表達
        2.4.2 溶瘤病毒對MenSCs感染效率的檢測
        2.4.3 MenSCs細胞內(nèi)病毒顆粒的電鏡檢測
        2.4.4 CRAd5/F11對MenSCs的毒性作用
        2.4.5 感染CRAd5/F11的MenSCs上清中病毒顆粒數(shù)檢測
        2.4.6 MenSCs-CRAd5/F11 表面標記的表達情況
        2.4.7 MenSCs-CRAd5/F11 體外對腫瘤細胞的趨化作用
        2.4.8 MenSCs-CRAd5/F11 在體內(nèi)對腫瘤組織的歸巢作用
    2.5 討論
        2.5.1 CRAd5/F11 依賴細胞受體CD46 感染MenSCs
        2.5.2 CRAd5/F11對MenSCs和腫瘤細胞的毒性作用
        2.5.3 MenSCs-CRAd5/F11 對腫瘤的靶向遷移
    2.6 結論
第三部分 MenSCs運載CRAd5-F11 治療結直腸癌的體內(nèi)外實驗研究
    3.1 前言
    3.2 材料與試劑
        3.2.1 主要試劑
        3.2.2 主要設備
        3.2.3 MenSCs及腫瘤細胞系來源
        3.2.4 溶瘤腺病毒CRAd5/F11及CRAd5/F11-TIS的構建
    3.3 實驗方法
        3.3.1 WB檢測腫瘤細胞表面腺病毒結合受體的表達
        3.3.2 CRAd5/F11對腫瘤細胞毒性作用的檢測
        3.3.3 運載CRAd5/F11的MenSCs對腫瘤細胞的抑制實驗
        3.3.4 荷瘤小鼠腫瘤模型的建立及腫塊大小的測量
        3.3.5 MenSCs的移植
        3.3.6 組織標本的制備
        3.3.7 腫瘤組織的免疫組化分析
        3.3.8 腫瘤組織細胞凋亡的TUNEL檢測
        3.3.9 MenSCs-CRAd5/F11-TIS對腫瘤的作用
        3.3.10 統(tǒng)計學分析
    3.4 實驗結果
        3.4.1 腫瘤細胞表面腺病毒受體蛋白的表達
        3.4.2 溶瘤病毒對腫瘤細胞具有殺傷作用
        3.4.3 攜帶CRAd5/F11的MenSCs對腫瘤細胞的殺傷作用
        3.4.4 病毒抗體血清對溶瘤病毒殺傷腫瘤細胞的影響
        3.4.5 體內(nèi)動物實驗操作及時間安排示意圖
        3.4.6 MenSCs-CRAd5/F11 移植后抑制腫瘤的生長
        3.4.7 腫瘤組織免疫組化相關蛋白的檢測
        3.4.8 MenSCs-CRAd5/F11 誘導腫瘤組織凋亡
        3.4.9 MenSCs-CRAd5/F11-TIS在體內(nèi)對腫瘤的抑制作用
    3.5 討論
        3.5.1 MenSCs運載CRAd5/F11 對腫瘤的治療
        3.5.2 溶瘤病毒對腫瘤細胞的殺傷和抑制機制
        3.5.3 溶瘤病毒結合基因治療
        3.5.4 溶瘤病毒CRAd5/F11從MenSCs胞內(nèi)釋放的機制探討
        3.5.5 MenSCs結合溶瘤病毒治療腫瘤的安全性問題
    3.6 結論
全文總結與展望
參考文獻
綜述 間充質(zhì)干細胞的基本特性與疾病治療的應用
    參考文獻
作者簡歷及在讀期間取得的科研成果



本文編號：3789573