發(fā)布時間：2023-04-10 23:35

　　肽基-脯氨�；樂串悩�(gòu)酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,Pin1)在多種腫瘤中異常激活,通過作用于其底物或相關(guān)信號通路促進腫瘤發(fā)生發(fā)展。宮頸上皮內(nèi)瘤變(squamous intraepithelial lesions,SIL)屬于癌前病變。低級別宮頸上皮內(nèi)瘤變(Low-grade squamous intraepithelial lesions,LSIL)預(yù)后良好,但LSIL進展為高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變(High-grade squamous intraepithelial lesions,HSIL)極大增加宮頸癌患病風(fēng)險,目前尚缺乏有效風(fēng)險評估的指標(biāo)。由于Pin1在腫瘤起始階段的獨特作用,在癌前病變階段檢測Pin1的表達作為發(fā)癌前病變階段的風(fēng)險分層指標(biāo)具有重要意義。宮頸癌轉(zhuǎn)移及化學(xué)敏感性降低是導(dǎo)致治療失敗的主要原因。Pin1一方面能夠與下游底物c-Jun、AKT、cyclinD1、β-catenin和STAT3等結(jié)合,催化順反異構(gòu)變化,調(diào)控下游靶點。另一方面通過激活下游多種致癌基因和生長促進劑,在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要促癌作用。靶向Pin1的治...

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第1章 綜述
    1.1 宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸癌
        1.1.1 HPV與宮頸癌
        1.1.2 LSIL可進展為宮頸癌
    1.2 Pin1在腫瘤中的作用
        1.2.1 Pin1蛋白結(jié)構(gòu)及功能
        1.2.2 Pin1與腫瘤發(fā)生發(fā)展
            1.2.2.1 Pin1在癌癥中的調(diào)節(jié)作用
            1.2.2.2 Pin1激活多種癌癥途徑
            1.2.2.3 Pin1和基因轉(zhuǎn)錄
            1.2.2.4 Pin1調(diào)節(jié)質(zhì)膜上受體/非受體蛋白酪氨酸激酶，Notch和磷酸酶
            1.2.2.5 Pin1調(diào)節(jié)MAPK和AKT途徑中的胞質(zhì)蛋白激酶
            1.2.2.6 Pin1調(diào)控有絲分裂和細(xì)胞周期
            1.2.2.7 Pin1調(diào)節(jié)糖酵解
            1.2.2.8 Pin1在應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞凋亡中的作用
            1.2.2.9 Pin1與病毒感染和轉(zhuǎn)化
        1.2.3 Pin1與腫瘤耐藥
            1.2.3.1 Pin1通過EMT促進耐藥
            1.2.3.2 Pin1通過腫瘤干細(xì)胞促進耐藥
            1.2.3.3 Pin1通過腫瘤微環(huán)境促進耐藥
    1.3 Pin1抑制劑的研究進展
        1.3.1 早期發(fā)現(xiàn)的Pin1抑制劑
        1.3.2 基于Pin1催化機制的小分子抑制劑
        1.3.3 基于蛋白結(jié)構(gòu)的Pin1抑制劑
        1.3.4 基于結(jié)構(gòu)域的小分子抑制劑
            1.3.4.1 基于PPIases結(jié)構(gòu)域的小分子抑制劑
            1.3.4.2 靶向WW結(jié)構(gòu)域的小分子抑制劑
        1.3.5 順反構(gòu)象特異性抗體
第2章 材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 細(xì)胞系
        2.1.5 實驗動物
        2.1.6 人宮頸病變組織樣本來源
    2.2 實驗方法
        2.2.1 免疫組織化學(xué)染色
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.3 KPT-6566合成方法
        2.2.4 細(xì)胞活力實驗（CCK8）
        2.2.5 細(xì)胞克隆形成實驗
        2.2.6 Western blot 免疫印跡法檢測蛋白表達實驗
        2.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡實驗
        2.2.8 TUNEL染色實驗
        2.2.9 細(xì)胞劃痕實驗
        2.2.10 Transwell細(xì)胞侵襲實驗
        2.2.11 動物實驗
        2.2.12 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 Pin1和c-Jun在宮頸SIL與宮頸癌組織中的表達及臨床意義
        3.1.1 宮頸SIL組織中Pin1和c-Jun的表達及臨床意義
            3.1.1.1 Pin1和c-Jun與LSIL進展率的關(guān)系
            3.1.1.2 Pin1和c-Jun在SIL中表達的相關(guān)性分析
        3.1.2 Pin1和c-Jun在宮頸癌組織中的表達及臨床意義
            3.1.2.1 Pin1和c-Jun在宮頸癌組織中表達與臨床信息的相關(guān)性分析
            3.1.2.2 Pin1和c-Jun在宮頸癌組織中的蛋白表達水平
    3.2 沉默Pin1體系的建立及鑒定
        3.2.1 在Hela和Siha細(xì)胞系中沉默Pin1并獲得穩(wěn)定細(xì)胞株
        3.2.2 合成新型Pin1抑制劑KPT-6566并鑒定
            3.2.2.1 Pin1特異性抑制劑KPT-6566的化學(xué)合成
            3.2.2.2 KPT-6566抑制Pin1及相關(guān)蛋白表達的鑒定
    3.3 Pin1作為宮頸癌治療靶點的研究
        3.3.1 抑制Pin1顯著降低宮頸癌細(xì)胞增殖能力
            3.3.1.1 抑制Pin1對宮頸癌細(xì)胞活力的影響
            3.3.1.2 抑制Pin1對宮頸癌細(xì)胞克隆形成的影響
        3.3.2 抑制Pin1顯著降低宮頸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力
            3.3.2.1 抑制Pin1對宮頸癌細(xì)胞遷移能力的影響
            3.3.2.2 抑制Pin1對宮頸癌細(xì)胞侵襲能力的影響
            3.3.2.3 體內(nèi)實驗檢測Pin1對宮頸癌轉(zhuǎn)移的影響
        3.3.3 Pin1通過c-Jun/Slug對宮頸癌細(xì)胞EMT的影響
            3.3.3.1 抑制Pin1對宮頸癌細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白表達的影響
            3.3.3.2 Pin1調(diào)控宮頸癌細(xì)胞EMT的機制
    3.4 KPT-6566增強順鉑對宮頸癌細(xì)胞殺傷效果的研究
        3.4.1 KPT-6566可顯著增強順鉑對宮頸癌細(xì)胞的殺傷效果
            3.4.1.1 KPT-6566和順鉑對宮頸癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響
            3.4.1.2 KPT-6566和順鉑對宮頸癌細(xì)胞凋亡的影響
        3.4.2 KPT-6566增強裸鼠異種移植瘤模型中順鉑的抗腫瘤作用
            3.4.2.1 KPT-6566和順鉑對宮頸癌細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力的影響
            3.4.2.2 KPT-6566和順鉑對移植瘤組織Pin1表達水平的影響
            3.4.2.3 KPT-6566和順鉑對移植瘤組織凋亡的影響
            3.4.2.4 KPT-6566聯(lián)合順鉑治療對小鼠主要臟器的影響
第4章 討論
    4.1 序言
    4.2 Pin1在LSIL中的臨床意義
    4.3 SIL與宮頸癌發(fā)病的探討
    4.4 Pin1作為宮頸癌新型治療靶點的理論依據(jù)
    4.5 KPT-6566與順鉑聯(lián)合應(yīng)用治療宮頸癌的前景
    4.6 KPT-6566用于聯(lián)合用藥治療的優(yōu)勢
第5章 結(jié)論
參考文獻
個人簡介及作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3788934