肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全球范圍內(nèi)的惡性腫瘤之一。在中國具有相對較高的發(fā)病率和病死率,2015年HCC新發(fā)病例和死亡病例數(shù)分別為466,100和422,100例。臨床上,由于缺乏特異性的生物標(biāo)志物和明顯的臨床癥狀,大多數(shù)HCC患者在被確診時已處于肝癌晚期,超過80%的患者出現(xiàn)預(yù)后不良。另外由于肝癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,目前應(yīng)用于臨床的治療方法都存在一定的局限性,且治療效果難以盡如人意。因此,研究與HCC發(fā)病和發(fā)展有關(guān)的分子機(jī)制從而發(fā)現(xiàn)新的治療靶點,同時研發(fā)新的有效的治療手段迫在眉睫。外泌體是由多種類型細(xì)胞分泌,粒徑在30～150 nm之間的囊泡樣小體。它包含有供體母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì)和核酸物質(zhì)(包括DNA和RNA),通過作為細(xì)胞間通訊的介質(zhì)參與多種生物學(xué)過程,如細(xì)胞增殖、遷移和凋亡活動等。其內(nèi)含物與機(jī)體的病理及生理狀態(tài)密切相關(guān)。有研究表明,外泌體在疾病,尤其是在癌癥的起源和發(fā)展中起著重要作用,是癌癥惡性進(jìn)展的重要參與者。因此分析循環(huán)外泌體中的內(nèi)含物、揭示HCC發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,有助于發(fā)現(xiàn)新的治療靶點、開發(fā)疾病的生物標(biāo)志物。近年來,循環(huán)外泌體中的長鏈...

【文章頁數(shù)】：206 頁

【學(xué)位級別】：博士

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摘要
ABSTRACT
第一章 利用肝癌外泌體發(fā)現(xiàn)LNC85 標(biāo)志物及相關(guān)作用機(jī)制研究
    前言
    1 實驗材料
        1.1 實驗樣本
        1.2 實驗細(xì)胞
        1.3 實驗試劑與耗材
        1.4 實驗儀器設(shè)備
    2 實驗方法
        2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代與凍存
        2.2 外泌體的提取與鑒定
        2.3 RNA全轉(zhuǎn)錄組測序
        2.4 肝細(xì)胞癌患者血漿外泌體中RNA表達(dá)特點分析
        2.5 實時熒光定量PCR
        2.6 細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染
        2.7 CCK-8 試劑盒檢測細(xì)胞增殖
        2.8 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡
        2.9 Transwell檢測細(xì)胞侵襲
        2.10 Westren blot分析細(xì)胞增殖蛋白
        2.11 生物信息學(xué)分析
        2.12 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 技術(shù)路線
    4 實驗結(jié)果
        4.1 采取血漿樣品的患者信息
        4.2 RNA全轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果
        4.3 HCC血漿外泌體中l(wèi)ncRNA與 mRNA的表達(dá)特征
        4.4 差異表達(dá)lncRNA的篩選
        4.5 候選差異表達(dá)lncRNA的 qRT-PCR驗證
        4.6 候選lncRNA對細(xì)胞增殖的影響
        4.7 對細(xì)胞凋亡的影響
        4.8 對細(xì)胞侵襲能力的影響
        4.9 lnc85 的亞細(xì)胞定位及靶基因的預(yù)測
        4.10 lnc85與mir-324-5p表達(dá)的關(guān)聯(lián)性
        4.11 lnc85 調(diào)控mir-324-5p下游基因的表達(dá)
        4.12 lnc85 在肝癌中的表達(dá)及臨床意義
    5 討論
    6 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第二章 CU-CY新型納米光敏劑抗肝癌及外泌體傳遞效應(yīng)的研究
    前言
    1 實驗材料
        1.1 實驗細(xì)胞
        1.2 實驗裸鼠
        1.3 主要的相關(guān)試劑
        1.4 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)與凍存
        2.2 銅胺納米材料的合成
        2.3 銅胺納米材料的表征
        2.4 RNO脫色實驗檢測單線態(tài)氧的產(chǎn)生
        2.5 MTT檢測細(xì)胞增殖實驗
        2.6細(xì)胞克隆形成實驗
        2.7 細(xì)胞熒光染色實驗觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)
        2.8流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡實驗
        2.9 蛋白免疫印跡分析
        2.10裸鼠皮下成瘤實驗
        2.11 蘇木精-伊紅染色
        2.12 細(xì)胞外泌體的提取及鑒定
        2.13 統(tǒng)計分析
    3 技術(shù)路線
    4 實驗結(jié)果
        4.1 銅胺納米材料物理性質(zhì)的表征
        4.2 Cu-Cy NPs在紫外光的激發(fā)下產(chǎn)生單線態(tài)氧
        4.3 Cu-Cy NPs對 HepG2 的細(xì)胞毒性
        4.4 紫外光照對細(xì)胞生長狀態(tài)的影響
        4.5 細(xì)胞對Cu-Cy NPs的攝取情況
        4.6 Cu-Cy NPs抑制細(xì)胞的增殖
        4.7 Cu-Cy NPs誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡
        4.8 Cu-Cy NPs抑制裸鼠移植瘤的生長
        4.9 外泌體可作為Cu-Cy NPs的運輸載體
    5 討論
    6 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
第三章 綜述
    1 外泌體的提取、鑒定及功能
        前言
        1.1 外泌體的提取技術(shù)
        1.2 外泌體的鑒定
        1.3 外泌體的功能
        1.4 展望
        參考文獻(xiàn)
    2 LNCRNA與肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移
        前言
        2.1 長鏈非編碼RNA的概述
        2.2 長鏈非編碼RNA的來源
        2.3 長鏈非編碼RNA的分類
        2.4 長鏈非編碼RNA的作用機(jī)制
        2.5 長鏈非編碼RNA與肝癌
        2.6 展望
        參考文獻(xiàn)
    3 光動力學(xué)治療癌癥的研究概況
        前言
        3.1 光動力學(xué)發(fā)展概述
        3.2 光動力治療的原理
        3.3 光動力治療的特點
        3.4 光敏劑及光源
        3.5 光動力學(xué)治療腫瘤的臨床應(yīng)用
        3.6 展望
    參考文獻(xiàn)
攻讀博士期間發(fā)表及未發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3788562