目的:大腸癌是一種世界性腫瘤,也是中國發(fā)病率上升最快的消化道惡性腫瘤。目前對于大腸癌的治療主要手段仍為手術(shù)切除,早期大腸癌的預后相對較好,但多數(shù)患者就診時已屬晚期,且大多數(shù)患者已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)移性大腸癌是癌癥相關(guān)死亡最常見的原因之一,關(guān)于其發(fā)生發(fā)展機制的研究,受到研究者的廣泛關(guān)注。大腸癌的轉(zhuǎn)移,受到多種因素的影響,其中血管新生和自身轉(zhuǎn)移在大腸癌的快速生長和轉(zhuǎn)移過程中起著舉足輕重的作用。腫瘤早期因其生產(chǎn)緩慢,消耗的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)極少,因而較少發(fā)生血管新生。若腫瘤早期沒有發(fā)生血管新生,其瘤體生長不會超過3mm³。腫瘤后期,隨著腫瘤細胞的不斷生長,瘤體不斷增大,導致腫瘤內(nèi)部缺乏氧氣和營養(yǎng)物質(zhì),這種缺氧以及營養(yǎng)缺乏的細胞外環(huán)境能刺激腫瘤細胞分泌多種血管新生相關(guān)因子和其他物質(zhì),誘導新血管的生成和腫瘤自身轉(zhuǎn)移,為腫瘤內(nèi)部細胞的快速生產(chǎn)提供充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)。在轉(zhuǎn)移性大腸癌中,缺氧環(huán)境下,大腸癌細胞究竟通過何種機制新生血管和轉(zhuǎn)移,對于抗腫瘤靶向藥物的研發(fā)至關(guān)重要。外泌體是一種起源于胞內(nèi)多囊體、由細胞主動分泌的大小約30nm-100nm的脂質(zhì)雙分子層小囊泡,幾乎所有細胞均能產(chǎn)生...

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文略縮語
第一部分 缺氧大腸癌細胞來源的外泌體通過Wnt4 介導的的β-catenin信號通路促進內(nèi)皮細胞的血管生成
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要材料與試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 步驟與方法
            2.2.1 外泌體提取及濃度測定
            2.2.2 Western Blot檢測外泌體蛋白表達水平
            2.2.3 慢病毒載體介導的HIF1α或 Rab27a/b沉默
            2.2.4 CCK-8 試驗檢測細胞增殖情況
            2.2.5 Transwell實驗
            2.2.6 外泌體RNA提取
            2.2.7 RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA
            2.2.8 qRT-PCR反應(yīng)
            2.2.9 裸鼠種瘤
            2.2.10 免疫組化
            2.2.11 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 缺氧CRC細胞與常氧CRC細胞來源的外泌體提取
        3.2 缺氧CRC細胞來源的外泌體對血管內(nèi)皮細胞的增殖和遷移的作用
            3.2.1 缺氧CRC細胞來源的外泌體對血管內(nèi)皮細胞的增殖的作用
            3.2.2 缺氧CRC細胞來源的外泌體對血管內(nèi)皮細胞的遷移的作用
        3.3 抑制缺氧CRC細胞來源的外泌體分泌后對內(nèi)皮細胞的增殖和遷移的作用
            3.3.1 抑制缺氧CRC細胞來源的外泌體分泌
            3.3.2 抑制缺氧CRC細胞來源的外泌體分泌后對內(nèi)皮細胞的增殖的作用
            3.3.3 抑制缺氧CRC細胞來源的外泌體分泌后對內(nèi)皮細胞的遷移的作用
        3.4 缺氧CRC細胞來源的外泌體中血管生長因子篩查及作用鑒定
            3.4.1 缺氧CRC細胞來源的外泌體中血管生長因子篩查
            3.4.2 缺氧CRC細胞來源的外泌體對敲減Wnt4的HUVEC的增殖作用
            3.4.3 缺氧CRC細胞來源的外泌體對敲減Wnt4的HUVEC的遷移作用
        3.5 Wnt4 上調(diào)依賴于缺氧,與HIF-1α相關(guān)
        3.6 缺氧CRC細胞來源的Wnt4 激活的β-catenin信號通路在內(nèi)皮細胞的增殖和遷移中的作用研究
            3.6.1 缺氧CRC來源的外泌體對HUVEC的 β-catenin信號通路的影響
            3.6.2 抑制β-catenin激活后,缺氧CRC細胞來源的外泌體分泌后對內(nèi)皮細胞增殖的作用
            3.6.3 抑制β-catenin激活后,缺氧CRC來源的外泌體分泌后對內(nèi)皮細胞遷移的作用
        3.6 體外實驗驗證缺氧CRC細胞來源的外泌體對CRC生長和血管新生的作用
            3.6.1 體外實驗驗證缺氧CRC細胞來源的外泌體對CRC生長的作用
            3.6.2 體外實驗驗證缺氧CRC來源的外泌體對血管新生的作用
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 缺氧大腸癌細胞來源的外泌體通過將Wnt4傳遞到常氧細胞中促進大腸癌轉(zhuǎn)移
    6 前言
    7 材料和方法
        7.1 主要試劑和儀器
            7.1.1 主要材料與試劑
            7.1.2 主要儀器
        7.2 步驟與方法
            7.2.1劃痕實驗
            7.2.2 HIF-1α敲減穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建
            7.2.3 Wnt4 敲減穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建
            7.2.4 其余實驗方法基本同前
            7.2.5 統(tǒng)計學分析
    8 結(jié)果
        8.1 缺氧CRC細胞與常氧CRC細胞來源的外泌體提取
        8.2 缺氧CRC細胞來源的外泌體對常氧CRC細胞遷移和侵襲能力的影響
            8.2.1 缺氧CRC細胞來源的外泌體對常氧CRC細胞遷移能力的影響
            8.2.2 缺氧CRC細胞來源的外泌體對常氧CRC細胞侵襲能力的影響
        8.3 抑制缺氧CRC細胞來源的外泌體分泌后對常氧CRC細胞遷移和侵襲的影響
            8.3.1 抑制缺氧CRC細胞來源的外泌體分泌
            8.3.2 抑制缺氧CRC細胞來源的外泌體分泌后對常氧CRC細胞遷移的影響
            8.3.3 抑制缺氧CRC細胞來源的外泌體分泌后對常氧CRC細胞侵襲的影響
        8.4 缺氧CRC細胞來源的外泌體誘導常氧CRC細胞的遷移和侵襲能力增加依賴于HIF-1α
            8.4.1 缺氧CRC細胞來源的外泌體中HIF-1α水平檢測
            8.4.2 敲低HIF-1α的缺氧CRC細胞來源的外泌體對常氧CRC細胞遷徙的影響
            8.4.3 敲低HIF-1α的缺氧CRC細胞來源的外泌體對常氧CRC細胞侵襲的影響
        8.5 缺氧CRC細胞來源的外泌體中的Wnt4 通過依賴于HIF-1α的方式促進常氧CRC細胞的遷移和侵襲
            8.5.1 缺氧CRC細胞來源的外泌體中Wnt4 水平檢測
            8.5.2 敲低缺氧CRC細胞HIF-1α來源的外泌體中Wnt4 水平檢測
            8.5.3 敲低缺氧CRC細胞HIF-1α來源的外泌體對常氧CRC細胞Wnt4 表達的影響
            8.5.4 缺氧CRC細胞來源的外泌體對敲低Wnt4 的常氧CRC細胞遷徙的影響
            8.5.5 缺氧CRC細胞來源的外泌體對敲低Wnt4 的常氧CRC細胞侵襲的影響
        8.6 缺氧CRC細胞來源的Wnt4 激活的β-catenin信號通路在常氧CRC細胞的遷移和侵襲中的作用研究
            8.6.1 缺氧CRC來源的外泌體對常氧CRC細胞β-catenin信號通路的影響
            8.6.2 抑制β-catenin激活后,缺氧CRC細胞來源的外泌體分泌后對常氧CRC細胞的遷移的影響
            8.6.3 抑制β-catenin激活后,缺氧CRC來源的外泌體分泌后對常氧CRC細胞的侵襲的影響
    9 討論
    10 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3787321