發(fā)布時間：2023-04-09 15:11

　　[目的]篩選系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周靜脈血單個核細胞(PBMC)中在轉(zhuǎn)錄水平與正常對照具有顯著差異表達的基因;驗證ETS1的表達水平,并分析該基因的表達與單核苷酸多態(tài)性(SNP)的相關(guān)性,探索SNP影響ETS1表達及其在B淋巴細胞中的機制及功能效應;根據(jù)SNP的基因位置,尋找影響ETS1變化的上游機制,并檢測下游ETS1對B細胞功能的影響;同時,探索SNP對SLE患者不同臨床表現(xiàn)的影響。本研究將為臨床早期診斷和疾病預后提供潛在標記物。[方法]收集3例SLE患者和3例健康對照的外周靜脈血,用二代測序技術(shù)篩查PBMC中具有顯著差異性表達的基因,進而通過GO、KEGG和Cytoscape分析顯著差異表達基因(DEGs)的富集情況。擴大樣本量后,用定量聚合酶鏈反應(qPCR)檢測ETS1在兩組樣本PBMC、B和Th淋巴細胞中的相對表達水平,SNaPshot技術(shù)進行基因分型;構(gòu)建rs4937333位點為野生型C或突變型T的ETS1質(zhì)粒并包裝慢病毒,感染SLE患者外周靜脈血B淋巴細胞,用qPCR和蛋白免疫印跡法(Western Blot,WB)檢測并比較ETS1的表達。進而將不同等位基因質(zhì)...

【文章頁數(shù)】：160 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 高通量測序分析
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論及小結(jié)
第二部分 SLE患者淋巴細胞ETS1及其SNP檢測
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論及小結(jié)
第三部分 SNP通過ETS1影響B(tài)細胞的分化
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論及小結(jié)
第四部分 miR-5003影響ETS1突變位點的功能
    引言
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論及小結(jié)
全文總結(jié)
局限性
展望
參考文獻
附錄
綜述 ETS1在狼瘡B細胞和Th細胞中作用機制的研究進展
    參考文獻
攻讀學位期間獲得的學術(shù)成果
致謝



本文編號：3787240