發(fā)布時間：2023-03-23 00:27

　　目的:檢測口腔扁平苔蘚(OLP)患者頰黏膜表面菌群變化,研究具核梭桿菌對角質(zhì)形成細(xì)胞TLR4/NF-κB通路的影響。方法:(1)收集健康對照與OLP患者頰黏膜樣本,高通量技術(shù)檢測細(xì)菌16S rRNA基因,篩選出對照組與OLP組之間頰黏膜表面差異最明顯的菌屬。(2)real-time PCR技術(shù)驗(yàn)證16S測序結(jié)果。其次,收集OLP患者損害與非損害黏膜樣本,檢測16S測序篩選出的細(xì)菌表達(dá)水平。最后,收集OLP患者與對照頰黏膜組織,檢測組織內(nèi)細(xì)菌表達(dá)。原位雜交技術(shù)檢測OLP患者頰黏膜內(nèi)細(xì)菌存在。(3)體外培養(yǎng)人正常口腔角質(zhì)形成細(xì)胞,并使用具核梭桿菌(ATCC25586)感染細(xì)胞。在感染后不同時間點(diǎn)檢測細(xì)胞增殖、IL-1β、IL-6與TNF-α表達(dá),以及細(xì)胞TLR4/NF-κB表達(dá)。結(jié)果:(1)16S測序發(fā)現(xiàn):(1)屬水平,與對照組比較,梭桿菌、顆粒鏈球、消化鏈球菌與小單胞菌屬在OLP組豐度增加。(2)線性判別分析發(fā)現(xiàn):對組間差異影響最大的菌屬是梭桿菌與顆粒鏈菌。(2)real-time PCR發(fā)現(xiàn),與非損害區(qū)域比較,具核梭桿菌在OLP黏膜損害表面表達(dá)升高(P=0.001﹤0.01)。在白紋型...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 口腔扁平苔蘚損害表面菌群改變及其與臨床類型的關(guān)系
    材料與方法
        1.1 材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    結(jié)果
        2.1 優(yōu)質(zhì)序列(quality control reads,Q-C 序列)長度分析
        2.2 稀釋曲線
        2.3 α多樣性分析
        2.4 健康對照組與OLP組菌群結(jié)構(gòu)分析
        2.5 線性判別分析健康對照組與OLP患者組之間差異菌屬
        2.6 PICRUSt 菌群基因功能預(yù)測
    討論
    小結(jié)
第二部分 口腔扁平苔蘚損害表面具核梭桿菌的鑒定及其與損害的相關(guān)性
    材料與方法
        1.1 材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    結(jié)果
        2.1 real-time PCR技術(shù)驗(yàn)證本研究第一部分16SrRNA 基因測序結(jié)果
        2.2 25 例 OLP 患者損害與非損害黏膜表面細(xì)菌與具核梭桿菌表達(dá)水平的自身對照研究
        2.3 回顧性分析 20 例 OLP 患者與 10 例健康對照黏膜組織內(nèi)細(xì)菌與具核梭桿菌的表達(dá)水平
        2.4 原位雜交技術(shù)檢測 OLP 患者頰黏膜組織內(nèi)細(xì)菌存在
    討論
    小結(jié)
第三部分 具核梭桿菌對人正�？谇唤琴|(zhì)形成細(xì)胞TLR4/NF-κB通路及其相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響
    材料與方法
        1.1 材料
        1.2 角質(zhì)形成細(xì)胞與具核梭桿菌
        1.3 BHI肉湯與主要試劑的配制
        1.4 方法
    結(jié)果
        2.1 具核梭桿菌的培養(yǎng)與鑒定
        2.2 角質(zhì)形成細(xì)胞的鑒定
        2.3 具核梭桿菌促進(jìn)了角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖
        2.4 具核梭桿菌對角質(zhì)形成細(xì)胞分泌促炎因子的影響
        2.5 具核梭桿菌增強(qiáng)了角質(zhì)形成細(xì)胞 TLR4 蛋白與磷酸化 NF-κB p65 蛋白表達(dá)
        2.6 具核梭桿菌促進(jìn)了角質(zhì)形成細(xì)胞TLR4 基因的表達(dá)
        2.7 口腔扁平苔蘚患者頰黏膜組織關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的分析
    討論
    小結(jié)
全文總結(jié)
創(chuàng)新之處
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間發(fā)表的論文或主持課題



本文編號：3767899