胃癌是世界發(fā)病率排名第四的惡性腫瘤,并且死亡率排在惡性腫瘤的第二名。胃癌在東亞地區(qū)的發(fā)病率極高,2008年,全球共有一百萬人罹患胃癌,其中74%的發(fā)病人口在東亞,47%在中國。盡管目前普遍認為胃癌的發(fā)生主要和幽門螺旋桿菌感染有關(guān),但癌基因的擴增、抑癌基因的突變和缺失也是造成胃癌發(fā)生和進展的重要因素。其中,染色體擴增導(dǎo)致的癌基因擴增對胃癌的發(fā)生非常關(guān)鍵,也是治療的重要靶點,如胃癌中ERBB2的擴增與不良預(yù)后顯著相關(guān),赫賽汀這樣靶向ERBB2的單抗是治療胃癌的有效手段。然而,目前人們對影響胃癌發(fā)生發(fā)展的基因并未完全了解,基于這些擴增基因開發(fā)的藥物也非常有限,因此胃癌的治療方式仍然是以手術(shù)和化療為主,靶向藥物除了ERBB2和VEGFR的抑制劑或單抗外,應(yīng)用的數(shù)量極為有限。因此,探索影響胃癌發(fā)生發(fā)展的癌基因,對于尋找治療胃癌的靶點和分子標(biāo)志物,具有非常重要的意義。以往的研究發(fā)現(xiàn),染色體的8q24區(qū)段是胃癌的擴增高發(fā)區(qū)段,其中就包括著名的癌基因c-MYC,促進腫瘤增殖、侵襲轉(zhuǎn)移、血管形成等一系列惡性的生物學(xué)行為。通過對胃癌8q24區(qū)段基因的分析,我們發(fā)現(xiàn)糖基磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)移酶GPAA1在胃癌中擴增... 

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 胃癌的流行病學(xué)
    1.2 胃癌的分類和治療
    1.3 胃癌病因?qū)W
    1.4 胃癌的分子分型
    1.5 胃癌信號通路
    1.6 糖基磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)移酶 GPAA1
    1.7 糖基磷脂酰肌醇錨定蛋白和腫瘤
第二章 GPAA1 在胃癌中的表達及臨床意義
    2.1 前言
    2.2 材料和試劑
        2.2.1 組織標(biāo)本
        2.2.2 587 例胃癌組織芯片
        2.2.3 免疫組織化學(xué)試劑
        2.2.4 蛋白免疫印跡(western blot)所需試劑和耗材
        2.2.5 蛋白免疫印跡常用試劑和緩沖液配制
        2.2.6 免疫組織化學(xué)常用試劑和緩沖液配制
        2.2.7 免疫組織化學(xué)和蛋白免疫印跡所需抗體
        2.2.8 實驗主要儀器設(shè)備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 數(shù)據(jù)挖掘和分析
        2.3.2 免疫組織化學(xué)染色步驟
        2.3.3 組織蛋白提取
        2.3.4 蛋白質(zhì)免疫印跡實驗
        2.3.5 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 GPAA1 在多種惡性腫瘤中顯著擴增
        2.4.2 數(shù)據(jù)庫驗證GPAA1 在胃癌組織中的表達顯著高于癌旁組織
        2.4.3 組織樣本驗證GPAA1 在胃癌組織中的表達顯著高于癌旁組織
        2.4.4 GPAA1 高表達與胃癌不良預(yù)后正相關(guān)
        2.4.5 GPAA1 表達與胃癌臨床分期和病理分級正相關(guān)
        2.4.6 ERBB2 的表達與胃癌臨床分期和病理分級的相關(guān)性
        2.4.7 GPAA1與ERBB2 在胃癌中的表達具有顯著相關(guān)性
        2.4.8 GPAA1與ERBB2 和胃癌生存期
        2.4.9 GPAA1 在胃癌中的預(yù)后意義
    2.5 討論
第三章 GPAA1 促進胃癌發(fā)展的功能研究
    3.1 前言
    3.2 材料和試劑
        3.2.1 材料
        3.2.2 試劑
        3.2.3 儀器
    3.3 方法
        3.3.1 數(shù)據(jù)挖掘與分析
        3.3.2 細胞培養(yǎng)
        3.3.3 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株構(gòu)建
        3.3.4 熒光定量PCR檢測
        3.3.5 細胞免疫熒光
        3.3.6 克隆形成
        3.3.7 細胞增殖
        3.3.8 細胞周期
        3.3.9 細胞侵襲轉(zhuǎn)移
        3.3.10 體內(nèi)轉(zhuǎn)移實驗
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 GPAA1 在胃癌細胞株的表達及穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建
        3.4.2 GPAA1 對胃癌的功能預(yù)測
        3.4.3 GPAA1 促進胃癌細胞增殖能力
        3.4.4 GPAA1 促進胃癌細胞的克隆形成能力
        3.4.5 GPAA1 促進胃癌細胞周期G1-S期轉(zhuǎn)換
        3.4.6 GPAA1 促進轉(zhuǎn)移相關(guān)GPI錨定蛋白的表達
        3.4.7 GPAA1 促進胃癌細胞體外侵襲和運動
        3.4.8 GPAA1 促進胃癌的肝轉(zhuǎn)移
    3.5 討論
第四章 GPAA1 促進胃癌發(fā)展的機制研究
    4.1 前言
    4.2 材料和試劑
        4.2.1 試劑
        4.2.2 儀器
    4.3 方法
        4.3.1 組織切片制作
        4.3.2 免疫組織化學(xué)染色
        4.3.3 脂筏提取
        4.3.4 PLA DuoLink
        4.3.5 蛋白質(zhì)免疫共沉淀
        4.3.6 小鼠荷瘤實驗
        4.3.7 蛋白質(zhì)免疫印跡試驗
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 GPAA1 促進細胞膜上脂筏的形成
        4.4.2 GPAA1 促進EGFR-ERBB2 相互作用
        4.4.3 GPAA1 促進EGFR-ERBB2 的共定位
        4.4.4 GPAA1 促進ERBB磷酸化下游信號通路激活
        4.4.5 GPAA1 促進胃癌細胞增殖依賴于EGFR-ERBB2 信號通路
        4.4.6 GPAA1 通過激活ERBB-AKT信號軸促進胃癌生長
    4.5 討論
第五章 討論和總結(jié)
致謝
科研成果
參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cancer statistics: updated cancer burden in China[J]. Wanqing Chen.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)
[2]Rho/ROCK signaling in motility and metastasis of gastric cancer[J]. Tasuku Matsuoka,Masakazu Yashiro.  World Journal of Gastroenterology. 2014(38)
[3]Gene-diet interactions in gastric cancer risk: A systematic review[J]. Jeongseon Kim,Young Ae Cho,Wook Jin Choi,Seung Hwa Jeong.  World Journal of Gastroenterology. 2014(28)
[4]Mutations in components of the Wnt signaling pathway in gastric cancer[J]. Kai-Feng Pan, Lian Zhang, Wei-Cheng You, Department of Cancer Epidemiology, Peking University School of Oncology and Beijing Cancer Hospital ＆ Institute, Beijing 100036, China Wan-Guo Liu, Division of Experimental Pathology, Department of Laboratory Medicine and Pathology, Mayo Clinic/Mayo Medical School, Rochester 55905, United States You-Yong Lu, Beijing Laboratory of Molecular Oncology, Peking University School of Oncology and Beijing Cancer Hospital ＆ Institute, Beijing 100036, China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(10)



本文編號：3732291